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目的:制备并鉴定携带小鼠神经生长因子前导肽（PN）和人内吗啡肽-2（EM-2）融合基因的重组非增殖型腺病毒。体外感染NIH3T3细胞观察转基因的表达。大鼠鞘内注射重组腺病毒,观察其对大鼠坐骨神经结扎疼痛模型的镇痛效应。方法:PN-EM-2目的基因经酶切插入pAxCAwt载体,构建PN-EM-2-pAxCAwt重组黏粒,脂质体转染293细胞获取重组腺病毒。PCR鉴定后扩增不含野生型病毒的阳性克隆并纯化,采用TCID50法测定病毒滴度:体外感染NIH3T3细胞观察转基因的表达,酶联免疫反应（EIA）及免疫荧光的方法测定表达产物。采用Bennett and Xie模型行大鼠右侧坐骨神经结扎术,在术后3d,进行鞘内置管后,大鼠鞘内分别注射带绿色荧光增强蛋白的重组腺病毒（Ad-EGFP组）、内吗啡肽-2重组腺病毒（Ad-PNEM2组）及生理盐水,给药后进行热痛阈测定,同时取脑脊液,ELISA检测内吗啡肽-2的表达,并且对热痛阈和内吗啡肽-2浓度的关系进行分析。结果:融合基因序列正确,PCR可检测到401 bp的融合基因条带并排除野生病毒株,腺病毒Ad-PN-EM-2滴度为2.03×1010pfu/ml。NIH3T3细胞转染病毒后,细胞培养液内可检测到EM-2的表达,明显高于未转染细胞（P<0.05）,且随时间的延长,表达水平逐渐上升。大鼠结扎热痛阈明显低于假手术组,鞘内给药后,Ad-PNEM2组热痛阈升高,明显高于NS组及Ad-EGFP组（P<0.05）;脑脊液中可见内吗啡肽-2的大量表达。热痛阈与脑脊液中EM2含量的呈线性关系（r=0.944,P<0.001）。结论:成功构建能够在非神经内分泌细胞内转基因表达成熟人EM-2的非增殖型腺病毒,大鼠鞘内注射重组腺病毒Ad-PNEM2对慢性神经病理痛大鼠有明显的镇痛效果,可能有望为慢性疼痛的治疗开辟了一种新的方法。