【摘 要】
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球虫病是鸡场中最普遍、损失最严重的疾病之一,并呈世界性分布.鸡球虫有个种,其中柔嫩艾美耳球虫(Eimena tenella)的分布最普遍、致病力最强.目前,鸡球虫病的防治主要依赖于抗球虫药物和疫苗.对抗球虫药物而言,随着药物的不断使用,耐药性的问题日益严重,需致力于找到新的药物靶标,来合成新型抗球虫药.沉默信息调节因子2(Silent Information Regulator 2,SIR2)是一
【机 构】
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云南农业大学 昆明650201;中国农业科学院上海兽医研究所 上海200241 中国农业科学院上海
【出 处】
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中国畜牧兽医学会家畜内科学会2014年学术研讨会
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球虫病是鸡场中最普遍、损失最严重的疾病之一,并呈世界性分布.鸡球虫有个种,其中柔嫩艾美耳球虫(Eimena tenella)的分布最普遍、致病力最强.目前,鸡球虫病的防治主要依赖于抗球虫药物和疫苗.对抗球虫药物而言,随着药物的不断使用,耐药性的问题日益严重,需致力于找到新的药物靶标,来合成新型抗球虫药.沉默信息调节因子2(Silent Information Regulator 2,SIR2)是一类具有NAD+依赖型去乙酰化酶活性的组蛋白去乙酰化酶,其高度保守,参与染色质沉默,对细胞的存活、衰老、凋亡等的调节起到十分重要的作用.寄生虫的SIR2基因已有报道,并发现其在寄生虫的抗原变异、端粒沉默和DNA修复等生理过程中发挥重要作用,且寄生虫与宿主之间的SIR2特性明显不同,是理想的抗寄生虫药物靶标,因此成为了研究的热点.本研究拟通过对柔嫩艾美耳球虫SIR2 (EtSIR2)基因的特性进行研究,从而了解SIR2的结构功能及在球虫体内所承担的重要生理学功能,为寻找潜在药物靶标筛选新药物奠定基础.通过克隆柔嫩艾美耳球虫SIR2基因,对其进行生物信息学分析；通过构建EtSIR2基因表达载体诱导表达重组蛋白,制备抗体,利用免疫荧光技术对EtSIR2蛋白在球虫不同发育阶段虫体中进行体内定位；利用定量PCR技术分析EtSIR2在球虫不同发育阶段虫体中mRNA转录水平的差异.成功克隆了EtSIR2基因,对EtSIR2蛋白进行亚细胞定位分析,结果显示其属于线粒体蛋白,不含跨膜结构域,不具有典型信号肽；通过免疫荧光技术发现EtSIR2蛋白定位于子孢子前端；EtSIR2基因在未孢子化卵囊阶段mRNA转录水平明显高于其他三个阶段.EtSIR2蛋白属于线粒体蛋白,表明其可能参与调控三羧酸循环,EtSItR2基因在未孢子化卵囊阶段mRNA转录水平最高,表明其可能参与柔嫩艾美耳球虫孢子囊的形成过程.
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