【摘 要】
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目的建立人感染高致病性H5N6禽流感病毒TaqMan-MGB探针双重实时荧光RT-PCR反应体系,用于疑似病例快速诊断及活禽交易市场外环境污染状况监测。方法根据GenBank中H5N6禽流感病
【基金项目】
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广东省医学科研基金立项资助(A2015573);肇庆市科技创新指导类项目(2015E1810)
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目的建立人感染高致病性H5N6禽流感病毒TaqMan-MGB探针双重实时荧光RT-PCR反应体系,用于疑似病例快速诊断及活禽交易市场外环境污染状况监测。方法根据GenBank中H5N6禽流感病毒HA和NA高保守基因序列设计特异引物对和TaqMan-MGB探针,建立和优化针对H5和N6基因的双重实时荧光RT-PCR反应体系,进行特异性、灵敏度、重复性试验评估,并在临床应用中与商品化试剂盒进行比较。结果本研究建立的H5N6双重实时荧光RT-PCR体系可在80min内完成检测,与其他亚型流感病毒及常见呼吸道病原体均无交叉反应,对阳性克隆质粒的灵敏度可达到10拷贝/反应,H5和N6靶基因实时荧光定量RT-PCR标准曲线的相关系数R2分别为0.999和0.993,对3个不同浓度的核酸RNA样本10次平行检测Ct值的变异系数分别为0.151%～0.549%和0.213%～0.575%,在临床应用验证试验中与主流商品化试剂盒的阳性和阴性符合率均一致。结论 H5N6禽流感病毒TaqMan-MGB探针双重实时荧光RT-PCR特异、灵敏、稳定,在疑似病例的早期快速应急检测及活禽交易市场外环境污染状况持续性监测方面具有较好的应用价值。
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