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目的:用双尾彗星试验(comet assay)鉴别精子DNA单、双链损伤,观察精子DNA单双链损伤在男性不育中的表达特征,揭示精子DNA双链损伤可能才是造成男性不育的真正原因,同时为男性不育的诊疗提供新的观察指标与思路.
方法:选择男性不育患者60例以及同期因女方因素不孕前来检查的生育力评估正常的健康男性作为对照组.统计分析两组精子DNA损伤及精浆主要参数的差异.精子浓度及活力用计算机辅助精子分析系统,精子存活率采用低渗膨胀实验,精子DNA链损伤用双尾彗星实验.
结果:双尾彗星实验检测精子DNA完整性共九种彗星模型.不育组与对照组比较,精子浓度、精子存活率和精子前向运动比率有非常显著性差异(p＜0.01),精子DNA单链损伤(single-stranded DNA breaks,SSB)指数SSB-DFI(％)无统计学意义(p＞0.05),精子总的损伤(DNA fragmentation index,DFI)指数DFI(％)和精子DNA双链损伤(double-stranded DNA breaks,DSB)指数DSB-DFI(％)及比率(％)有非常显著性差异(p＜0.01).绘制ROC曲线DSB-DFI比率、DSB-DFI及DFI诊断男性不育最佳截断值分别为39.5％、15.85％和18.65％,曲线下面积(AUC)、敏感度和特异性分别为(0.969,98.3％,90.0％) (0.912,86.7％,80.0％) (0.861,90.0％,,70.0％).不育组精子SSB-DFI与精液常规参数均无相关关系(p＞0.05),DFI与精子前向运动及存活率呈负相关(p＜0.01),与精子浓度无相关关系(p＞0.05),精子DSB-DFI及比率与精子浓度、存活率及精子前向运动均呈显著负相关(p＜0.01).
结论:影响男性不育真正的DAN损伤因素可能关键是"双链损伤",而与"单链损伤"相关性不大,如能明确精子DNA链的损伤类型,将对男性生殖能力的评估有更大的参考价值.