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目的：通过研究常规慢速冷冻及玻璃化冷冻后的Day3人胚胎,检测印记基因H19的DNA甲基化状态,并与新鲜未冷冻胚胎相比较,初步了解冷冻技术对胚胎基因印记的影响.方法：经医院伦理委员会批准及患者知情同意,选择2008-2011年在广州南方医院和贵阳市妇幼保健院行IVF/ICSI治疗的患者,胚胎移植术后收集正常受精(2PN)低质量的Day3胚胎进行常规慢速冷冻或玻璃化冷冻保存,解冻后用于印记基因甲基化分析,其中常规慢速冷冻组78个,玻璃化冷冻组74个；收集新鲜Day3胚胎70个作为研究对照.采用结合重亚硫酸盐的限制性酶分析(COBRA)、亚硫酸盐测序PCR (BSP)技术检测各组印记基因H19的DNA甲基化状态并进行组间比较.结果：慢速冷冻组、玻璃化冷冻组和新鲜未冷冻组印记基因H19的PCR扩增成功率分别为51.3％(40/78), 71.6％(53/74)和82.9％(58/70)；慢速冷冻胚胎的PCR成功率显著小于玻璃化冷冻胚胎和新鲜未冷冻胚胎(P<0. O1)；玻璃化冷冻胚胎的PCR成功率与新鲜未冷冻胚胎无显著差别(P>0. 1)。慢速冷冻组的H19基因平均甲基化程度为44. 8％士6.4％,4个胚胎出现异常低甲基化，异常率10.0％(4/40)；玻璃化冷冻组平均甲基化程度为47. 5％士5. 6％， 7个胚胎出现异常低甲基化，异常率13.2％ (7/53)新鲜未冷冻组平均甲基化程度为46. 7％士6.0％, 2个胚胎出现低甲基化异常，异常率3.4％ (2/58)。慢速冷冻、玻璃化冷冻和新鲜未冷冻胚胎H19基因的甲基化程度无显著差别(P>0. 1)；慢速冷冻、玻璃化冷冻和新鲜未冷冻胚胎H19基因异常甲基化发生率无显著差别(P>0. 1)。结论：慢速冷冻胚胎的PCR扩增成功率低，可能由于慢速冷冻产生的冰晶对细胞造成机械性损害。冷融操作可能并未增加胚胎甲基化异常的发生率，但是需进一步扩大样本量，扩展基因种类深入研究以验证此假设。