【摘 要】
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在Genebank上查出人乙醛脱氢酶2cDNA,根据毕赤酵母(Pichia pastoris)密码子偏好性,对其进行了全面的密码子改造,并采用重叠延伸PCR的方法合成了两段人乙醛脱氢酶2基因：06A
【机 构】
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武汉工程大学化工与制药学院,绿色化工过程省部共建教育部重点实验室,湖北省新型反应器与绿色化学工艺重点实验室,湖北武汉430074
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在Genebank上查出人乙醛脱氢酶2cDNA,根据毕赤酵母(Pichia pastoris)密码子偏好性,对其进行了全面的密码子改造,并采用重叠延伸PCR的方法合成了两段人乙醛脱氢酶2基因：06ALDH2和07ALDH2。将这两段基因克隆至毕赤酵母表达载体pPIC9K上,分别得到重组质粒pPIC9K-06ALDH2和pPIC9K-07ALDH2。用电转化法将其转化至Pichia pastoris GS115中,经G418筛选,分别得到GS115 (pPIC9K-06ALDH2)和GS115(pPIC9K-07ALDH2)。GS115(pPIC9K-06ALDH2)表达量约为0.8mg/L发酵液,酶比活约为47.3U/g；GS115(pPIC9K-07ALDH2)表达量约为8mg/L发酵液,酶比活约为31.9U/g。
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