【摘 要】
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热休克蛋白90(Heat shock protein 90,HSP90)是活化参与病原转化细胞发育和进程的许多信号转导蛋白分子不可或缺的分子伴侣,本研究通过筛选cDNA文库、快速扩增cDNA末端(R
【机 构】
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家畜疫病病原生物学国家重点实验室,甘肃省寄生虫学重点实验室,中国农业科学院兰州兽医研究所,甘肃,兰州 730046
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第十三次学术研讨会
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热休克蛋白90(Heat shock protein 90,HSP90)是活化参与病原转化细胞发育和进程的许多信号转导蛋白分子不可或缺的分子伴侣,本研究通过筛选cDNA文库、快速扩增cDNA末端(RACE)和PCR扩增等方法,从感染我国羊的莫氏巴贝斯虫临潭株(Babesia motasi Lintan)体内克隆获得一个2399bp的热休克蛋白90的家族成员BQHsp90基因,其完整开放阅读框为2154bp,编码一83kDa的蛋白.多序列分析比较发现其与牛巴贝斯虫(B.bovis)、环形泰勒虫(Theileria annulata)、小泰勒虫(T.parva)和恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)的hsp90的相似性分别为92.0%,81.9%,81.7%和70.6%.通过比较BQHsp90的基因组和cDNA序列数据发现BQHsp90含有两大小分别为403bp和142bp的内含子,将其分隔成3个外显子.然后在其保守区设计通用引物,在感染我国羊的其它巴贝斯虫分离株莫氏巴贝斯虫宁县株(B.motasi Ningxian)、莫氏巴贝斯虫河北株(B.motasi Hebei)、莫氏巴贝斯虫天祝株(B.motasi Tianzhu)和羊巴贝斯虫未定种新疆株(Babesia sp.Xinjiang)体内扩增获得大小分别为2339bp,2340bp、2332bp和2166bp大小的Hsp90的基因片段,序列比对显示羊巴贝斯虫未定种新疆株的Hsp90的核苷酸序列和氨基酸序列与其它4株莫氏巴贝斯虫的相似性最低,小于80%和90%,而最高的分别在临潭株与天祝株(99.4%和99.3%)和宁县株与河北株(98.8%和99.5%)之间.以应用Mega4.0建立遗传发育树,进化分析显示5个感染羊的巴贝斯虫分离株被分到两个大枝上,羊巴贝斯虫未定种新疆株单独为一枝,其它4株莫氏巴贝斯虫为一枝.然而这4株莫氏巴贝斯虫又分为两小枝,临潭株与天祝株为一枝,宁县株与河北株为一枝.这一结果与Uilenberg的观点相一致——莫氏巴贝斯虫组内可能还有两种或亚种.最后,应用巴贝斯虫和泰勒虫的阳性血清,评价了重组的BQHSP90蛋白(rBQHSP90)的抗原性和反应原性,结果显示,rBQHSP90可以用于区分泰勒虫和巴贝斯虫的感染,但不能区分巴贝斯虫种间的感染.
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