【摘 要】
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目的西藏小型猪酪氨酸酶基因特异性锌指的合成与鉴定方法采用overlap PCR法拼接合成西藏小型猪酪氨酸酶基因特异性锌指两对tyrZ131-DD/RR及tyrZ131-KK/EL,,将锌指转染GFP突变
【机 构】
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南方医科学实验动物中心; 中科院广州生物医药与健康研究院;
【基金项目】
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广东省农业攻关计划项目(2009A1-e051-3)
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目的西藏小型猪酪氨酸酶基因特异性锌指的合成与鉴定方法采用overlap PCR法拼接合成西藏小型猪酪氨酸酶基因特异性锌指两对tyrZ131-DD/RR及tyrZ131-KK/EL,,将锌指转染GFP突变的转基因293T细胞,进行锌指有效性验证。转染后细胞在荧光显微镜下观察是否出现绿色荧光,同时应用流式分析修复效率。结果合成两对锌指,测序证实锌指序列正确。将两对锌指转染293T细胞模型72h后,可见细胞开始表达绿色荧光蛋白。流式细胞分析发现锌指tyrZ131-KK/EL的修复率高达0.29%,tyrZ131-DD/RR的修复效率为0.23%。但镜下观察,前者细胞的死亡率更高。结论锌指tyrZ131-DD/RR及tyrZ131-KK/EL均能特异性识别酪氨酸酶基因特异序列,并发生切割并在修复质粒的作用下进行修复,证实为有效锌指对。
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