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为了在小鼠体内研究靶向防龋质粒的靶向作用机制,构建以小鼠细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(cytotoxic Tlymphocyte-associated antigen 4, CTLA4)为引导的抗变形链球菌(Streptococcus mutans,S.mutans)葡糖基转移酶(glucosyltransferases,GTFs)的靶向防龋质粒pMGJGLU/GFP,体外转染COS7细胞检测质粒编码的融合蛋白的表达。采集小鼠外周血,密度梯度离心分离单个核细胞,提取其总RNA。利用RT-PCR法扩增小鼠CTLA4基因的信号肽和胞外区并进行T-A亚克隆,获得携带小鼠CTLA4信号肽和胞外区基因的质粒pMCTLA。对pMCTLA进行双酶切,电泳回收小鼠CTLA4片段,将其连接到切去了人CTLA4片段的靶向防龋质粒pGJGLU/GFP中,获得编码小鼠CTLA4信号肽和胞外区、人Igγ1片段、变形链球菌GLU片段和绿色荧光蛋白的重组质粒pMGJGLU/GFP。将pMGJGLU/GFP转染COS7细胞,通过绿色荧光蛋白的自发荧光观察融合蛋白在胞内的表达,并用蛋白免疫印迹方法检测分泌到胞外的融合蛋白。通过RT-PCR获得了小鼠CTLA4的信号肽和胞外区基因,通过酶切、连接构建了小鼠靶向防龋质粒pMGJGLU/GFP。pMGJGLU/GFP转染的COS7细胞能够表达绿色荧光蛋白,细胞培养上清中可以检测到分泌的融合蛋白。成功构建了小鼠靶向防龋质粒pMGJGLU/GFP,pMGJGLU/GFP能够在体外正确表达。