【摘 要】
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将NA-1株鹅源副粘病毒毒种接种于11日龄SPF鸡胚，收集36～72h死亡的鸡胚尿囊液。参考已发表的鹅源副粘病毒M基因序列，设计并合成了两对特异性引物，用以扩增鹅源副粘病毒NA－1株F、HN基因，预期扩增的基因片段包含完整的开放阅读框。通过RT-PCR扩增出鹅源副粘病毒NA-1株F、HN基因片段。琼脂糖凝胶电泳回收、纯化，得到F、HN基因片段，经EcoR I，Sal I消化。将F、HN基因克隆进入
【机 构】
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吉林大学预防兽医学国家重点学科动物重要病原与疫病研究室,吉林长春,130062
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会
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将NA-1株鹅源副粘病毒毒种接种于11日龄SPF鸡胚，收集36～72h死亡的鸡胚尿囊液。参考已发表的鹅源副粘病毒M基因序列，设计并合成了两对特异性引物，用以扩增鹅源副粘病毒NA－1株F、HN基因，预期扩增的基因片段包含完整的开放阅读框。通过RT-PCR扩增出鹅源副粘病毒NA-1株F、HN基因片段。琼脂糖凝胶电泳回收、纯化，得到F、HN基因片段，经EcoR I，Sal I消化。将F、HN基因克隆进入pET-28a载体，转化大肠杆菌DH5a，挑选菌落，经限制性核酸内切酶Sal I和EcoR I双酶切及PCR鉴定，结果证明重组真核表达载体pET-F、pET-HN构建成功，将构建的表达载体分别转化表达菌BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达。经SDS—PAGE分析，原核表达的F、HN蛋白分子量在59 Ku，63Ku，1 mM(终浓度)IPTG时间梯度诱导表达，3 h时F蛋白表达产量最高，占总菌体蛋白含量的23.9％；5 h时HN蛋白表达量最高，占整个菌体蛋白含量的26.2％；Western-blot检测发现原核表达的重组蛋白分别能与鼠抗GPMV阳性血清反应，证明原核表达的F蛋白、HN蛋白具有一定的反应原性。
其他文献
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通过应用酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked immunity assay，ELISA)方法。对青海农区猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproduction and respiratory syndrome，PRRS)进行血清流行病学调查。五年来(2003年-2007年)所采集猪血样9788份，用美国IDEXX公司的血清PRRSV抗体检测试剂盒检测，其血清抗体阳性率是10.6％。结
猪圆环病毒2型(PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合症(PMWS)的重要病原，给养猪业带来巨大的经济损失。本研究以PCV2 GZ株为研究对象，经生物信息学软件分析其ORF2抗原性的分布特点，参照资料报道，选定ORF2基因的主要抗原位点分布区域(tORF2)，PCR扩增后亚克隆至表达载体pET32a，构建重组表达质粒pET-tORF2并转化大肠杆菌RosettaⅡ(DE3)。经IPTG诱导后进行聚
利用λ噬菌体的Red重组系统，将氯霉素抗性基因(cat)插入到大肠杆菌0157：H7 Min27株的stx2基因中，获得O157：H7 Min27的突变菌株Min27(△six：：cat)。用丝裂霉素对该突变菌株进行诱导，结合抗性标记和PCR方法筛选出一株突变的Stx2噬菌体，命名为φMin27(△stx：：cat)。将φMin27(△stx：：cat)感染21株不同血清型的大肠杆菌，采用双层琼脂
采用PCR方法对62株大肠杆菌菌株进行stx基因检测，将筛选到含有stx基因的菌株进行噬菌体诱导、分离、纯化和鉴定，并对编码Stx2的噬菌体(Stx2噬菌体)相关基因进行序列测定。将分离的Stx2噬菌体溶源大肠杆菌MC1061实验菌株，获得的Stx2噬菌体溶源菌作为指示菌筛选诱导细菌滤液中的Stx2噬菌体以外的噬菌体。实验中筛选到8株大肠杆菌O157菌株经丝裂霉素c诱导后均优先释放Stx2噬菌体，
目的:分析上海猪swChinash HEV与已知其它HEV基因型的差异和人源HEV的关系。方法:设计22对PCR引物，分片段进行扩增，两末端采用快速扩增方法(RACE)扩增，扩增产物克隆到pMD18-T载体并测序，用DNASTAR软件与53株人源和猪源HEV的基因组进行同源性分析，用Clustalx和Mega3.0软件绘制基因进化树。结果:swChinash全序列除去poly(A)尾，由7235个
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