【摘 要】
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目的：构建表达大鼠caspase-3 siRNA的腺病毒,体外观察其抑制内毒素诱导的神经元凋亡的效果。方法：合成正、反义寡核苷酸并克隆入pShuttleHl载体,与含caspase-3及绿色荧光增强蛋白序列的质粒pEGFPC1-Cas3共转染293细胞,流式细胞仪分析荧光强度；pShuttleH1-siCas3线性化后电转化到含pAdEasy-1的BJ5183感受态细菌中获取重组质粒,脂质体转染2
【机 构】
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200438 上海第二军医大学东方肝胆外科医院麻醉科 200433 上海中国人民解放军胸心外科研究
【出 处】
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2007年中华医学会麻醉学分会全国疼痛医学学术年会
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目的：构建表达大鼠caspase-3 siRNA的腺病毒,体外观察其抑制内毒素诱导的神经元凋亡的效果。
方法：合成正、反义寡核苷酸并克隆入pShuttleHl载体,与含caspase-3及绿色荧光增强蛋白序列的质粒pEGFPC1-Cas3共转染293细胞,流式细胞仪分析荧光强度；pShuttleH1-siCas3线性化后电转化到含pAdEasy-1的BJ5183感受态细菌中获取重组质粒,脂质体转染293细胞获取重组腺病毒Ad-siCas3；TCID50法测定病毒滴度；感染海马神经元,观察内毒素诱导的神经元细胞caspaze-3 mRNA的表达及凋亡情况。
结果：目的基因序列正确,pShuttleH1-siCas3可明显减弱pEGFPC1-Cas3绿色荧光,Ad-siCas3滴度为1.06×1010pfu/ml.转染病毒的海马神经元内毒素诱导的凋亡效应及caspase-3 mRNA的表达明显减弱.
结论：首次成功构表达大鼠caspase-3 siRNA的腺病毒,具有良好的抑制神经元凋亡作用,为下一步大鼠疼痛模型中抗凋亡缓解疼痛奠定基础.
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