第一内含子DNA甲基化在子宫内膜异位症中对SF-1的上调作用

来源 :中华医学会第十次全国妇产科学术会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qishi008
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  目的:研究第一内含子CpG岛甲基化在子宫内膜异位症中对SF-1的调节作用。方法:子宫内膜异位症患者行手术剥除卵巢异位囊肿,并取子宫内膜作为对照。组织取出后,立即做细胞原代培养,分离出间质细胞,并进行传代。在位内膜组8例,异位内膜组8例。Real Time PCR定量分析检测SF-1基因mRNA表达量。将在位内膜、卵巢内异症病灶(异位内膜组织)进行石蜡切片,免疫组化Envision二步法法检测S-1蛋白的表达。PCR、克隆、Busulfite测序方法(每例随机取6到8个克隆进行测序)研究SF-1基因内含子区域的CpG岛的甲基化程度。运用相关分析了解内含子区域的CpG岛的甲基化机制与SF一1基因表达的相关性。同时应用免疫组化法方法检测SF一1蛋白在在位和异位内膜中的表达和定位。结果:1. Real Time PCR定量分析显示SF-1mRNA在异位病灶的间质细胞中高度表达,但是在位内膜的间质细胞中没有表达,差异达9000多倍,P<0. 001。2.在位内膜的腺体和间质细胞中均无SF-1蛋白表达;卵巢内异症病灶的间质细胞核SF-1蛋白的阳性表达率为82%(14/17),P<0. 001。3. DNA经Bisulfate试剂处理后,PCR扩增2256p片段DNA,克隆,每例随机取6到8个克隆进行测序,(共18个CG位点)显示第一内含子的CpG岛在在位内膜中低度甲基化,在异位内膜中高度甲基化,有显著性差异,P<0. 001。 4. DNA甲基化程度和mRNA表达有相关性,spearmancon elation coefficient相关系数为0. 96 , P < 0. 0001。结论:SF-1基因的第一内含子的CpG岛的甲基化在子宫内膜异位症中对SF一1表达有调节作用。因为SF一1可以促进芳香化酶和局部雌激素的合成,因此该研究对了解子宫内膜异位症的病因,以及为找到更有效的治疗方法提供实验依据。
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