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引言新型鸭呼肠孤病毒（NDRV）宿主范围广、致病性强,且跟禽呼肠孤病毒（ARV）、番鸭呼肠孤病毒（MDRV）抗原相关性较低,研究NDRV在BHK-21细胞系中的增殖规律,观察病毒对细胞的致病变效应（CPE）,并对病毒核酸及其蛋白的表达和病毒增殖特性进行了鉴定,为研制疫苗及研究NDRV的致病机理等奠定基础。材料与方法NDRVTH11株由本实验室分离和鉴定,BHK-21细胞系由本实验保存。rTaq DNA聚合酶购自TaKaRa公司;FITC和HRP标记的山羊抗兔IgG二抗购自中杉金桥公司（北京）。兔抗NDRV-σC多克隆抗体和兔抗NDRVTH11血清由本实验室制备并保存。将NDRV TH11株尿囊液接种BHK-21细胞收获细胞培养物,取病毒RNA,进行RT-PCR检测。其进行IFA检测。最后将病毒感染的细胞培养物裂解后,经SDS-PAGE电泳后转至PVDF膜,Western blot检测,绘制NDRV在BHK-21细胞上生长曲线。结果显微镜观察结果:MDRVTH11株在BHK-21细胞中培养24h后,可观察到CPE出现,48h细胞病变明显,主要为巨融合病变,随后细胞出现空泡,最终肿胀、崩解,72h细胞基本全部脱落,而对照组细胞生长正常（图1略）。病毒检测:RT-PCR检测显示,特异性基因片段长约966 bp（图2略）。该PCR产物的序列测定结果表明该序列与NDRVTH11株的基因序列同源性在99.99%以上。进行IFA检测,结果显示,有大量特异性绿色荧光出现（图3略）,表明NDRV病毒蛋白获得了良好表达。用Western blot对感染NDRV的BHK-21细胞进行免疫学检测,结果显示,在BHK-21细胞裂解物中能检测到σC蛋白的存在（分子量约34kDa）,而且能够与抗σC的特异性抗体发生反应（图4略）,证明NDRV病毒蛋白获得了良好表达,且具有良好反应原性。一步生长曲线:显示TH11毒株感染BHK-21细胞后0-12 h为潜伏期,12 h后开始增殖,12-36 h进入快速增殖期,48 h病毒滴度即达到最高,TCID50为106.57/0.1 mL,随后病毒的增殖随着细胞的崩溃而降低（图5略）。NDRV TH11在BHK-21细胞系上培养的最佳收获时间为36-48 h。讨论目前NDRV可采用SPF鸡胚或鸭胚分离培养,这种方法虽然有效,但是比较费时。据文献报道,NDRV具有较广的细胞亲嗜性,能在MDEF、CEF、Vero、AD293、MDCK等多种细胞系中增殖并产生细胞病变。为筛选适合于NDRV TH11株增殖的细胞系,我们先后将TH11株病毒感染Vero、DF1、BHK-21和CEF等细胞系,实验结果显示该病毒在上述细胞中都能增殖,但是在BHK-21细胞中增殖效果最好病毒滴度也最高,提示BHK-21细胞系有进一步用于研制NDRV灭活疫苗的潜力。我们的研究结果表明,该病毒能在BHK-21细胞中有效增殖,且在感染48 h后,病毒滴度能达到峰值:TCID50为106.57/0.1 mL。本研究为研制新型鸭呼肠孤病毒细胞灭活疫苗奠定了基础,并为开展该病毒的分子生物学研究提供了一个良好操作平台。