【摘 要】
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建立可同时检测鸭坦布苏病毒与鸭瘟病毒的双重RT-PCR,为有效防控DTMUV与DPV提供技术支撑.根据GenBank中DTMUV E基因和DPV UL6基因的保守序列,设计合成两对引物,优化反应体系条件,并通过特异性、敏感性试验评价建立的双重RT-PCR.优化后的双重RT-PCR反应体系为:2×PCR Mix 12.5 μL,其中DTMUV上、下引物各0.5 μL,DPV上、下引物各0.5 μL,
【机 构】
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广西兽医研究所/广西畜禽疫苗新技术重点实验室,广西南宁530001
【出 处】
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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会
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建立可同时检测鸭坦布苏病毒与鸭瘟病毒的双重RT-PCR,为有效防控DTMUV与DPV提供技术支撑.根据GenBank中DTMUV E基因和DPV UL6基因的保守序列,设计合成两对引物,优化反应体系条件,并通过特异性、敏感性试验评价建立的双重RT-PCR.优化后的双重RT-PCR反应体系为:2×PCR Mix 12.5 μL,其中DTMUV上、下引物各0.5 μL,DPV上、下引物各0.5 μL,混合模板2.0 μL,加ddH2O补足至25.0 μL;最佳反应程序:95℃ 5 min; 95℃ 1 min,54.4℃ 1 min,72℃ 1 min,35个循环;72℃ 10 min.该方法对DTMUV与DPV的检测敏感性分别达500 fg和600 fg,但对鸭源新城疫病毒、鸭肝炎病毒、番鸭细小病毒、鸭圆环病毒、H9亚型禽流感病毒和减蛋综合症病毒等病原体不敏感.建立的双重RT-PCR可用于DTMUV与DPV感染的快速鉴别诊断.
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