【摘 要】
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实时荧光定量PCR ( real-time quantitative PCR, qPCR )因灵敏度高,定量准确等特点,已广泛应用于基因表达 分析。利用合适的参照基因对qPCR 数据进行校正处理是确保该方法分析
【机 构】
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苏州大学基础医学和生物科学学院,江苏苏州 215123
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实时荧光定量PCR ( real-time quantitative PCR, qPCR )因灵敏度高,定量准确等特点,已广泛应用于基因表达 分析。利用合适的参照基因对qPCR 数据进行校正处理是确保该方法分析准确性的关键。本实验首先分别用三种浓 度的芸香苷溶液添食家蚕,通过检测家蚕谷胱甘肽-S-转移酶基因d1( BmGSTd1 )的诱导转录水平,分析得出浓度为 5×10-2 ng/μL的芸香苷溶液能起到显著的诱导作用;为了选出适用于家蚕诱导实验中qPCR 分析的合适参照基因,测 定了BmGSTd1在正常饲养及添食芸香苷(5×10-2 ng/μL)后在中肠和脂肪体中的转录水平,分别用两种内参基因( Actin3 , GAPDH )和加入外源参照基因( IFP2 )对qPCR数据进行标准化,结果发现内源和外源基因标准化的结果差异很大;最 后测定三种内参基因的诱导转录水平,结果显示,二者在两种组织中的诱导转录水平均有较大变化。分析比较这些 结果表明,管家基因在诱导后的表达不再恒定,而外源基因则不受实验条件的影响,能保证定量结果的准确性。选 择加入外源参照基因对qPCR 数据进行归一化处理,是家蚕诱导实验中检测基因表达的合适方法。
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