【摘 要】
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目的：获取大量具有良好生物活性的早孕因子(EPF)重组变应原。
方法：HeLa 细胞中提取总RNA，利用RNase-free DNaseI处理总RNA，采用RT-PCR的方法扩增EPF基因，将扩增产物和载体pGE
【机 构】
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广州医学院公共卫生与全科医学学院，广州510182
【出 处】
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中国环境诱变剂学会风险评价专业委员会第四届第三次委员会议暨全国第11届学术会议——低碳环境与遗传损害研讨会
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目的：获取大量具有良好生物活性的早孕因子(EPF)重组变应原。
方法：HeLa 细胞中提取总RNA，利用RNase-free DNaseI处理总RNA，采用RT-PCR的方法扩增EPF基因，将扩增产物和载体pGEX-5X-1进行双酶切后回收，连接载体和目的片段，获得重组质粒．将重组质粒转化大肠杆菌BL21。在大肠杆菌BL21中通过IPTG进行诱导表达，然后用谷胱甘肽-琼脂糖球珠亲和层析纯化得到纯的EPF蛋白。用SDS-PAGE鉴定其纯度，用玫瑰花环抑制试验(RIT)检测生物学活性。
结果：以HeLa细胞总RNA为模板，采用RT-PCR的方法有效扩增出EPF基因。EPF基因以正确的阅读框架插入表达载体PGEX-5X-1,经IPTG诱导后高效表达EPF蛋白。RIT显示目的蛋白具有良好的EPF生物学特性。
结论：成功构建了EPF的原核表达载体，并纯化了具有生物学特性的重组蛋白，为进一步开展EPF蛋白的相关研究奠定了基础。
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