【摘 要】
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自诱导信号分子AI-2(Autoinducer-2,AI-2)作为细菌间的通用自诱导信号分子,参与细菌众多生理功能的调控。本研究通过开展AI-2在鸭疫里氏杆菌(Riemerella antatipestifer,RA)CH3株对非洲绿猴肾细胞(Vero 细胞)的粘附、入侵以及对RA 相关基因调控作用的研究,为进一步研究AI-2对RA的调控作用奠定基础。
【机 构】
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中国农业科学院上海兽医研究所,上海 200241
【出 处】
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中国畜牧兽医学会禽病学分会第三届全国禽病分子生物技术青年学术论坛
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自诱导信号分子AI-2(Autoinducer-2,AI-2)作为细菌间的通用自诱导信号分子,参与细菌众多生理功能的调控。本研究通过开展AI-2在鸭疫里氏杆菌(Riemerella antatipestifer,RA)CH3株对非洲绿猴肾细胞(Vero 细胞)的粘附、入侵以及对RA 相关基因调控作用的研究,为进一步研究AI-2对RA的调控作用奠定基础。
其他文献
为了探讨鸭圆环病毒(DuCV)致病机理,本研究以DuCV 抗原性蛋白Cap为切入点,将截去核定位信号的Cap 基因进行PCR 扩增,T克隆测序正确后将目的片段连到原核表达载体pET-32a(+),构建原核表达质粒pET-32a-Cap,并转化至宿主菌Rosetta(DE3)。
为构建鸭圆环病毒Cap 基因酵母双杂交诱饵载体，以本实验室分离鉴定的DuCV GH01 株为模板，将扩增的Cap 基因连接到pGM-T 载体，测序正确后，克隆至pGBKT7 载体上，经菌落PCR 及酶切鉴定，转化酵母菌株Y2HGold 感受态，检测诱饵蛋白表达以及诱饵蛋白对酵母细胞毒性和自激活现象。
从临床表现为肝脏坏死性白点为主要病变的病死番鸭肝脏中分离到1株MDRV,该毒株可在DF-1 细胞中增殖并产生明显的细胞病变(CPE).病毒基因组为dsRNA,在SDS-PAGE 中可形成3/3/4 电泳带型.通过单引物扩增技术(FLAC)和生物软件分析可知：该病毒10个基因组片段全长22,967bp,G+C 含量约51.41％；
新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)为呼肠孤病毒科正呼肠孤病毒属成员,是鸭出血坏死性肝炎的病原。自2005年以来,鸭出血坏死性肝炎在我国的浙江、福建和广东省流行,且其流行趋势逐年加强,给养鸭业造成较大的经济损失。
参考Genbank 番鸭呼肠孤病毒(muscovy duck reovirus,MDRV)S 和M 基因序列设计合成引物,对MDRV 强毒MW9710株和弱毒CA株S基因和M基因组RT-PCR扩增后,进行S和M基因测序和特性分析；提取MDRV 强毒MW9710 株和弱毒CA 株病毒RNA,合成cDNA第一条链和第二条链,构建cDNA文库,进行L基因测序和特性分析。
为了解新型鸭呼肠孤病毒(NDRV TH11 株)σC蛋白的抗原性，本研究采用RT-PCR 方法扩增了NDRVTH11株σC蛋白的编码基因，将其克隆于原核表达载体pET-30a(+)中，转化大肠杆菌 BL21(DE3)，经IPTG诱导表达His-σC重组蛋白.SDS-PAGE 和Western blot 分析表明该重组蛋白获得高效表达，并具有较好的反应原性.
本研究在对新型鸭呼肠孤病毒TH11株全基因组序列测定的基础上,构建了同时含有T7启动子和DRVTH11株所有基因节段的重组质粒,并在M2节段引入了遗传标记。然后,将这些重组质粒共转染BSR细胞系。观察结果表明,细胞在转染36h出现细胞融合现象,48h出现典型病变。对拯救的病毒分别进行了RT-PCR 和IFA 检测,结果表明能成功扩增出TH11的特异性基因,同时也检测到了遗传标记(HindⅢ)。
应用双向电泳、质谱分析和生物信息学技术研究感染番鸭呼肠孤病毒(MDRV)的发病番鸭与健康番鸭的表达蛋白差异。结果共鉴定出38 个差异表达蛋白，包括10个表达下调的蛋白、17个表达上调的蛋白、7个仅在正常番鸭肝脏里表达的蛋白和4个仅在感染MDRV的番鸭肝脏里表达的蛋白。
研究信号分子AI-2对禽致病性大肠杆菌(APEC)的调控作用.采用改良结晶紫半定量法和荧光染色法检测AI-2对APEC生物被膜形成能力的影响[1,2,3].Real-time PCR检测AI-2对APEC毒力基因转录水平的影响.活菌计数法观察AI-2对APEC黏附和入侵鸡胚成纤维细胞DF-1的影响.
应用细菌学方法无菌取肝脏和关节肿疱液接种鲜血琼脂培养基进行细菌分离，挑取鲜血琼脂培养基上均一生长的菌落划线接种麦康凯斜面用于细菌鉴定，将分离的大肠杆菌涂布鲜血琼脂培养基进行药敏试验。