水稻细菌性条斑病菌中PilZ结构域蛋白的功能分析

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环二鸟苷酸(c-di-GMP)是一类普遍存在于细菌内的第二信使分子,参与调控多种细胞代谢过程。细菌体内存在多种类型c-di-GMP的受体,其中包括含退化的GGDEF-EAL结构域蛋白和PilZ结构域蛋白等。这些受体蛋白负责感知细胞内c-di-GMP浓度的变化,并启动或抑制下游特定基因的表达。水稻细菌性条斑病(bacterial leaf streak,BLS)是由稻生黄单胞菌条斑致病变种(Xanthomonas.oryzae pv.oryzicola,Xoc)引起的一种细菌性病害。在柑橘溃疡病菌中,FimX-PilZPilB形成蛋白复合体调控四型纤毛生物合成。本研究成功构建了Xoc中3个编码PilZ结构域蛋白的基因敲除突变体△pilZXoc-1、△pilZXoc-2、△pilZXoc-3,对其生物膜、胞外多糖、蛋白酶分泌、游动性、滑动性及致病性进行了检测。发现△pilZXoc-1、△pilZXoc-2、△pilZXoc-3生物膜形成、胞外多糖合成、蛋白酶分泌以及游动性与野生型菌株相比均无明显差异,但△pilZXoc-1滑动性上升,致病力下降;ITC实验显示PilZXoc-2和PilZXoc-3在体外均能与c-di-GMP结合,PilZXoc-1则不能与c-di-GMP结合;通过细菌双杂交与离体GST pull-down技术,也证实了Xoc中FimXXoc-PilZXoc-1-PilBXoc三元复合体的存在;PilZXoc-1的104—114位氨基酸是PilZXoc-1与PilBXoc互作的关键区域,且在滑动性的调控上发挥重要作用;此外,透射电镜观察到△pilZXoc-1菌体表面的T4P数量与野生型相比明显减少。以上结果为研究c-di-GMP信号调控途径提供了重要信息。
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