【摘 要】
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目的：通过基因工程技术原核表达害嗜鳞螨主要过敏原Lep d 2,结合生物信息学分析其抗原肽与MHC Ⅱ分子结合能力,对其过敏原性进行改造。为获取重组低过敏原的提供依据,提高重组过敏原作为免疫治疗制剂的安全性。方法：在Uniprot中获取Lep d 2的氨基酸序列(序列号：P80384)；将Lep d 2基因序列进行修饰和密码子优化,人工合成全基因片段；设计去信号肽引物并将合成后的Lep d 2基因
【机 构】
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广州医科大学附属第二医院/中法霍夫曼免疫研究所/广东省过敏反应与免疫重点实验室/呼吸疾病国家重点实验室/变态反应国家临床重点专科/广州市过敏反应临床医学研究与转化中心
【出 处】
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广东省医学会第九次变态反应学学术会议
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目的：通过基因工程技术原核表达害嗜鳞螨主要过敏原Lep d 2,结合生物信息学分析其抗原肽与MHC Ⅱ分子结合能力,对其过敏原性进行改造。为获取重组低过敏原的提供依据,提高重组过敏原作为免疫治疗制剂的安全性。方法：在Uniprot中获取Lep d 2的氨基酸序列(序列号：P80384)；将Lep d 2基因序列进行修饰和密码子优化,人工合成全基因片段；设计去信号肽引物并将合成后的Lep d 2基因进行高保真PCR,获取去信号肽的rLepd2基因；获得的rLepd2基因与表达载体pET-44a连接后,转入大肠杆菌Rosetta中进行重组表达；使用生物信息学方法分析其抗原肽与MHC Ⅱ分子结合能力,通过定点突变技术,改造高值位点区域,构建含有突变型基因的表达菌株。采用亲和层析方法与免疫印迹技术对突变蛋白进行鉴定和纯化。
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