【摘 要】
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利用PCR方法从本实验室保存的番木瓜环斑病毒(papaya ringspot virus,PRSV)、番木瓜畸形花叶病毒(papaya leaf distortion mosaic virus,PLDMV)和番木瓜花叶病(papaya mosaic virus,PaMV)的全长基因组的质粒上分别扩增了三种病毒的外壳蛋白(coat protein,CP)基因,并连接到原核表达载体pET-28a上,将
【机 构】
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中国热带农业科学院热带生物技术研究所,海南海口571101;海南师范大学生命科学学院,海南海口271158
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利用PCR方法从本实验室保存的番木瓜环斑病毒(papaya ringspot virus,PRSV)、番木瓜畸形花叶病毒(papaya leaf distortion mosaic virus,PLDMV)和番木瓜花叶病(papaya mosaic virus,PaMV)的全长基因组的质粒上分别扩增了三种病毒的外壳蛋白(coat protein,CP)基因,并连接到原核表达载体pET-28a上,将获得的重组质粒pET28-PRSV CP、pET28-PLDMV CP和pET28-PaMV CP分别转化到大肠BL21(DE3),IPTG诱导后,SDS-PAGE分析显示这三种CP蛋白在大肠杆菌中高效表达,其中PRSV CP蛋白和PLDMVCP以包涵体形式存在,PaMV CP以融合蛋白形式存在.利用Ni+-NTA琼脂糖亲和层析获取了三种病毒的重组CP蛋白,并免疫大白兔获得高效价的抗体.Western blot检测结果表明,这三种抗血清与对应的诱导表达蛋白发生特异反应.采用上述抗血清建立了一种快捷、简便和低成本的ID-ELISA技术(Indirect enzyme-linked immunosorbent assay),并利用此技术对海南岛283个疑似感病番木瓜样品进行了检测鉴别,初步掌握了海南岛三种主要番木瓜病毒的分布及感病情况,这为下一步采取针对性的有效防治策略提供了科学依据.
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