【摘 要】
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目的 采用宏基因组学测序技术观察甘薯sporamin 蛋白干预4 周后的裸鼠粪菌移植液对结直肠癌LOVO 细胞荷瘤鼠腹腔移植瘤生长及肠道菌群的影响,探索sporamin 抑制结直肠癌的作用机制.方法 将20 只雄性健康裸鼠随机分为4 组(5 只/组):1)对照组(CG1):正常饲养4 周后收集粪便菌群并腹腔接种人结直肠癌LOVO 细胞系;2)sporamin 组(CG2):先收集经饮水摄取spor
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目的 采用宏基因组学测序技术观察甘薯sporamin 蛋白干预4 周后的裸鼠粪菌移植液对结直肠癌LOVO 细胞荷瘤鼠腹腔移植瘤生长及肠道菌群的影响,探索sporamin 抑制结直肠癌的作用机制.方法 将20 只雄性健康裸鼠随机分为4 组(5 只/组):1)对照组(CG1):正常饲养4 周后收集粪便菌群并腹腔接种人结直肠癌LOVO 细胞系;2)sporamin 组(CG2):先收集经饮水摄取sporamin蛋白(平均剂量0.485g/只/d)4 周后的粪便菌群并,然后接种癌细胞并继续给予4 周sporamin 蛋白;3)对照粪菌移植组(TCG):正常饲养3 周后经饮水给予氨苄青霉素(100ug/ml)1 周以杀灭肠道菌群,然后与CG1 组供体小鼠同一天接种癌细胞,并灌胃给予CG1 组粪菌液,2 次/周(剂量10ml/kg/只/次);4)sporamin 粪菌移植组(TTG):前处理方式同TCG 组,但灌胃给予CG2 组的粪菌液.所有动物在实验第8 周最后一天取粪便样品进行宏基因组学测序分析.结果 CG2 组比CG1 组、TTG 组比TCG 组、TCG 组比CG1 组的肿瘤重量、数量均降低,但差异没有统计学显著性意义.宏基因组学测序检测到包括细菌、真菌、病毒在内共97 个门,1863 个属,7525个种.KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)通路分析显示检测到的微生物基因与细胞进程(细胞运动、细胞群体等)、环境信息处理(膜转运、信号传导等)、遗传信息处理(折叠、分拣和降解、复制和修复、翻译等)、人类疾病(抗药性、感染性疾病等)、代谢(氨基酸代谢、碳水化合物代谢、核苷酸和维生素代谢等)、有机系统(老化、内分泌系统、免疫系统、神经系统等)有关.COG(Clusters of Orthologous Groups of proteins,直系同源序列聚类)分析显示检测到的微生物基因功能主要与碳水化合物转运和代谢、DNA 复制、重组和修复、细胞壁/膜/包膜的生物发生、氨基酸转运和代谢、防御机制、信号转导机制、能量产生和转换等有关.GO(全称)分析中涉及到的分子功能包括催化活性、结合、转运活性、核酸结合转录因子活性、分子转导活性、分配布局分子活性、蛋白结合转录因子活性等,主要涉及到的细胞组件包括细胞、细胞部分、膜、膜部分、细胞器、细胞器部分等,涉及到的生物过程主要包括代谢过程、细胞过程、单有机体过程、生物调节、刺激反应、胞质定位、信号传递分子等.菌群相对丰度分析显示:在门水平上前5 位的肠道菌群依次是厚壁菌门、拟杆菌门、衣原体门、变形菌门、子囊菌门.PCoA、NMDS等Beta 多样性分析结果 显示:动物肠道CG1 和TCG 组菌群结构相似,CG2 和TTG 菌群结构相近.与CG1 和TCG 组相比,CG2 组和TTG 组拟杆菌门均显著升高,且拟杆菌门细菌成为TTG 组的第一优势菌,而不是其它三组的厚壁菌门.结论 直接摄取甘薯sporamin 蛋白或者摄取sporamin 蛋白干预4 周后的粪菌移植液均可以改变结直肠癌荷瘤鼠的肠道菌群结构,降低厚壁菌门,升高拟杆菌门的相对丰度,并使腹腔移植瘤略减轻.本研究结果 表明甘薯sporamin 蛋白可能通过改善肠道菌群结构对结直肠癌细胞移植瘤的生长产生抑制作用,但还需要通过延长干预时间及扩大样本量进一步确认肠道菌群改变在sporamin 作用机制中的重要性.
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