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以重组腺病毒转移载体P-ORF2,P-γ-IFN为模板,应用Primer5.0设计了2对引物,其中一对引物P1,P2用于猪圆环病毒2型ORF2基因的扩增,另一对引物P3,P4则用于γ-IFN基因的扩增。再以所扩增的2段基因为模板,P1,P4为引物扩增融合基因ORF2-γ-IFN。将所扩增的串联基因连接PMD-18T-Simple Vector,经PCR方法和限制性内切酶分析鉴定该串联基因已成功转入重组质粒中(命为PMD-ORF2-γ-IFN)。腺病毒转移载体Pshuttle-CMV和PMD-ORF2-γ-IFN经双酶切后再切胶回收并连接后,经PCR方法和限制性内切酶酶切法及测序证明两基因已成功连接,由此获得了重组腺病毒转移载体Pshuttle-CMV-ORF2-γ-IFN。
重组腺病毒转移载体经PmeI酶切线性化后,在BJ5173细菌中与腺病毒骨架载体pAdEasy-1同源重组获得重组腺病毒质粒pAD-CMV-ORF2-γ-IFN。经PCR方法和Pacl酶切方法及测序鉴定表明该重组腺病毒载体已得到成功构建。