重组鼠疫菌LcrV抗原的制备工艺研究

来源 :第十次全国生物制品学术会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhqs1
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研究并建立重组鼠疫耶尔森氏菌LcrV抗原(Yersinia pestisV Antigen)的发酵与纯化工艺。通过观察LcrV工程菌pET-V/BL21(DE3)在试管和锥形瓶中的生长和表达规律,确定了最佳培养基、最佳诱导剂(IPTG)浓度、最佳诱导时间等条件,然后放大到30 L半自动发酵罐中进行补料批培养。发酵中采用限制性流加氮、碳源,保持溶解氧20%,pH7.0,结果经IPTG(1 mM)诱导4 h,最终菌体密度达到39A600(相当于干菌15.6 g/L)。重组蛋白V抗原的表达量占菌体总蛋白的35%左右,含量达到1.54 g/L。收获菌体经冻融,离心分离上清高压匀浆后,依次经Q.Sepharose H.P.,Phenyl Sepharose 6 FF,Superdex75 prep grade柱层析纯化,每升发酵产物最终可以得到0.18g左右、纯度为95%以上的重组鼠疫菌LcrV抗原,整个纯化工艺的蛋白回收率为14.0%。
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