体外染色体畸变实验毒性评价参数比较

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【目的】毒性评价参数对于开展体外染色体畸变实验非常重要,不合适的毒性表征可能会导致与遗传毒性不相关的染色体畸变发生(假阳性)。常用的毒性评价参数有相对细胞倍增数抑制(RPD),相对细胞增长数抑制(RICC),相对细胞数抑制(RCC)及有丝分裂指数抑制(MI)。比较上述四个参数表征毒性的差别【方法】体外染色体畸变实验遵循OECD 473和ICH S2(R1)指导原则,实验系统CHO—WBL来源于Merck,细胞生长在含10%灭活胎牛血清McCoy’s 5A培养基中,并在条件为37°±1°C和4%8%CO2的CO2培养箱中培养。实验包括三个给药处理系列,短期处理S9活化3小时系列和非活化3小时系列,长期处理非活化20/22小时系列。细胞收获后,检测活细胞个数,根据活细胞个数计算RPD,RICC和RCC,然后低渗固定细胞,制片染色,阅读得出MI。通过收集整理本实验室一年多来进行的体外染色题畸变实验数据,得出上述四个参数,共计15个实验,然后得到四个参数对应的大概50%毒性的剂量,然后以RPD为大概50%毒性的剂量为基准进行比较。由于短期处理细胞毒性相对较小,所以我们主要考察长期处理系列【结果】在这15个实验中,阴性对照组的PD值为1.21,范围为0.97—1.36。RCC与RPD比较,由于RCC没有考虑到细胞增殖,RCC低估了细胞毒性,RCC为大概50%毒性的剂量是RPD为大概50%毒性的剂量的1.17—2.67倍;RICC与RPD比较,相关性很高,RICC为大概50%毒性的剂量是RPD为大概50%毒性的剂量的0.5—1倍;MI与RPD比较,相关性很差,MI为大概50%毒性的剂量是RPD为大概50%毒性的剂量的0.05—2.5倍。【结论】RCC相对于RPD和RICC低估了细胞毒性;RPD和RICC相关性很高,这两个参数也是0ECD指导原则推荐使用的毒性评价参数。MI是个间接毒性判定指标,而且受细胞培养,收获时间及毒性大小影响很大,所以不推荐用于毒性评估。
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