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目的:(1)通过甲基化芯片筛选出在胃癌细胞中发生异常甲基化的基因。(2)进一步研究候选基因甲基化作为胃癌诊断标志物的可行性。方法:(1)通过Roche-NimbleGen DNA高密度的甲基化芯片,筛选出在胃癌细胞株中发生高频甲基化基因作为候选的肿瘤标志物。(2)通过甲基化特异性PCR(MSP)分析候选基因在胃癌患者组织中及血清中甲基化发生率,并分析血清中这些基因甲基化检测作为胃癌诊断的可行性。(3)结合去甲基化试剂5-Aza-CdR处理,探讨去甲基化对胃癌细胞系中这些高甲基化基因再表达的影响。结果:(1)通过Roche-NimbleGenDNA高密度的甲基化芯片发现了82个基因,其启动子区域在胃癌细胞系中发生高甲基化而在正常胃粘膜中发生低甲基化或未甲基化。(2)发现在胃癌患者胃癌组织、癌旁组织及血清中甲基化率发生高的基因有BX141696、WT1、CYP26B1和KCNA4,(p<0.05);对胃癌患者血清中及组织中这些基因的甲基化状态进行Pearson相关系数分析,显示WT1(r=+0.505,p=0.027)和KCNA4(r=+0.664,p=0.002)具有较好的相关性;-血清中联合检测CYP26B1和KCNA4基因的甲基化状态,可以显著提高敏感度(91.3%),且仍具有较髙特异度(92.1%);分析胃癌病人的临床病理特征与这些基因甲基化状态关系发现,WT1在胃癌患者血清中的甲基化状态与肿瘤浸润深度(p<0.05)及临床分期(p〈0.05)相关;CYP26B1在胃癌患者血清中的甲基化状态与淋巴结转移情况(p〈0.05)及临床分期(p〈0.05)相关。(3)去甲基化试剂5-Aza-CdR处理可以使胃癌细胞的BX141696、WT1、CYP26B1和KCNA4基因表达量升髙。结论:(1)与正常人相比,BX141696、WT1、CYP26B1和KCNA在胃癌患者的肿瘤组织、癌旁组织及血清中甲基化发生率高,血清中町1、CYP26B1和KCNA甲基化状态可以代表肿瘤组织相应基因的甲基化状态。(2)在血清中,联合检测CYP26B1和KCNA在血清中的甲基化状态,可显著提高敏感度。(3)ffTl在胃癌患者血清中的甲基化状态与肿瘤浸润深度及临床分期相关,CYP26B1在胃癌患者血清中的甲基化状态与淋巴结转移情况及临床分期相关。(4)去甲基化处理可以使胃癌细胞株中发生高甲基化的BX141696、WT1、CYP26B1和KCNA4基因表达量升高。