腺病毒介导的GFP在鸭胚成纤维细胞中的表达及RNA干涉

来源 :中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:samdragon
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原代细胞具备二倍体的遗传性、来源方便,可作为RNA干涉(RNAi)效果的体外评价系统,可方便地研究病毒与宿主相互作用机制及其基因功能,也可作为筛选有效的siRNA分子用于病毒感染防治的平台。本研究将不同感染复数(MOI)的绿荧光蛋白重组腺病毒(Adv-GFP)感染鸭胚成纤维细胞(DEF),用流式细胞仪分别测定感染后24、36、48和60h GFP表达效率及对细胞的影响;此外,用脂质体转染试剂将化学合成的靶向GFP基因的小干扰RNA(GFP-siRNA)转染DEF,6h后再感染200 MOI的Adv-GFP.结果显示:10~200 MOIAdv-GFP均能够感染DEF并表迭GFP,且对DEF的形态及活力无明显影响,GFP的表达率为5.4±0.29~31.2±3.11%,500 MOIAdv-GFP则对DEF有显著的致细胞病变作用;GFP-siRNA能显著干涉Adv-GFP介导的GFP基因在DEF中的表达,相对抑制率为98.56%。证明DEF细胞与其它真核生物一样存在RNA干涉机制,Adv-GFP在一定的MOI范围内对DEF是安全的,且转染效率较高,是理想的外源基因表迭载体;本研究为RNA干涉技术研究DEF易感病毒和鸭的基因组功能以及病毒感染防治奠定了基础。
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