【摘 要】
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露湿漆斑菌(Myrothecium roridum)是一种对大豆、棉花、扁豆、茄、辣椒、甜菜、番茄、苘麻、蓖麻、锦葵等经济作物的一种致病真菌,露湿漆斑菌生成的单端孢霉烯毒素对于其致病性十分重要,而单端孢霉烯合成酶是单独孢霉烯生物合成的关键酶.因此,我们从露湿漆斑菌中提前总RNA,逆转录得到cDNA,设计特异性引物扩增得到Tri5基因,将该基因插入至大肠杆菌表达载体pET22b中,然后转化至大肠杆菌
【机 构】
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广东省微生物研究所,广州,510070
【出 处】
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第八届全国微生物资源学术暨国家微生物资源平台运行服务研讨会
论文部分内容阅读
露湿漆斑菌(Myrothecium roridum)是一种对大豆、棉花、扁豆、茄、辣椒、甜菜、番茄、苘麻、蓖麻、锦葵等经济作物的一种致病真菌,露湿漆斑菌生成的单端孢霉烯毒素对于其致病性十分重要,而单端孢霉烯合成酶是单独孢霉烯生物合成的关键酶.因此,我们从露湿漆斑菌中提前总RNA,逆转录得到cDNA,设计特异性引物扩增得到Tri5基因,将该基因插入至大肠杆菌表达载体pET22b中,然后转化至大肠杆菌BL21 (DE3)中进行异源表达并进行Western blot验证,得到分子量为45 kD的单端孢霉烯合成酶,采用Ni亲和层析柱进行纯化,得到目标蛋白的纯度为81.3％,产量为47.5 mg/L. 该单端孢霉烯合成酶催化底物顺式法尼基焦磷酸的主要产物经过GC-MS检测,为一种烯类物质.实验结果表明该单端孢霉烯合成酶在单端孢霉烯毒素生物合成过程中发挥十分重要的作用,为后期控制单端孢霉烯毒素对经济作物的危害奠定理论基础.
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