论文部分内容阅读
目的 多肽毒素具有高通道选择性和多样化的药理学功能,是研究电压门控钠通道结构和功能关系的重要配体分子.敬钊毒素-Ⅲ (Jingzhaotoxin-Ⅲ,JZTX-Ⅲ)是从我国有毒蜘蛛敬钊缨毛蛛毒液中分离纯化到的一种新型门控调节型神经毒素,由36个氨基酸残基组成.它能高亲和力和选择性地抑制电压门控钠通道亚型Nav1.5和电压门控钾通道亚型Kv2.1激活.已有研究报道Nav1.5和Nav1.8通道在进化过程中位于同一分支,两种亚型之间具有很高的序列同源性,但JZTX-Ⅲ是否对表达在ND7/23细胞上的钠通道亚型Nav1.8有抑制作用尚不清楚.本研究检测了JZTX-Ⅲ对异源表达在ND7/23细胞上电压门控钠通道亚型Nav1.8的电流和通道动力学的影响.方法 采用阳离子交换层析和反相高效液相色谱(RP-HPLC)分离纯化JZTX-Ⅲ,MALDI-TOF质谱检测其分子量.提取Nav1.8通道质粒,体外培养ND7/23细胞,利用LipofectamineTM2000脂质体转染试剂盒转染Nav1.8和绿色荧光蛋白质粒至ND7/23细胞中表达,转染后24-48 h,膜片钳电生理检测JZTX-Ⅲ对Nav1.8通道电流和通道动力学的影响.结果 JZTX-Ⅲ抑制Nav1.8通道电流,并且这种抑制作用具有时间和浓度依赖性,其抑制时间常数和IC50值分别为41.15 ±0.6s和1.4±0.23 μmol/L.JZTX-Ⅲ能使Nav1.8通道的电流-电压关系曲线和稳态激活曲线分别向去极化方向漂移大约10 mV和9 mV,使Nav1.8通道的稳态失活曲线往超极化方向漂移-16 mV,明显改变Nav1.8通道的激活和稳态失活动力学特征.氨基酸序列比对结果显示JZTX-Ⅲ捕获Nav1.5通道的关键受体残基Arg800在Nav1.8通道的DIIS3～S4 linker上高度保守.结论 JZTX-Ⅲ对Nav1.8通道激活和失活动力学有调制作用,可能采用相似于捕获Nav1.5通道分子机制抑制Nav1.8通道激活,为进一步探索电压门控钠通道结构与功能之间关系奠定基础.