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目的:明确破骨细胞外泌体对成骨细胞分化的作用,探究其介导成骨细胞和破骨细胞之间动态平衡的可能分子机制。方法:以核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)刺激小鼠骨髓来源巨噬细胞(bone marrow macrophages,BMMs)并与骨磨片共培养后构建破骨细胞骨吸收模型,采用超速离心法提取获得囊泡分泌物,并通过纳米颗粒跟踪分析(nanoparticle tracking analysis,NTA)鉴定其直径,Western blot鉴定外泌体表面特征性标记。将该外泌体作用于诱导分化的乳鼠颅骨成骨样细胞,采用real time-PCR、Western blot技术检测成骨细胞分化特异性标志碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、runt相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,RUNX2)、骨钙素(osteocalcin,OCN),及RANKL、骨保护素(osteoclastogen,OPG)的表达水平,明确其对成骨细胞分化的影响。进一步通过Western blot技术检测成骨细胞分化及骨形成过程中重要的Janus激酶/信号转导子及转录激活子通路(Janus kinase/signal transducer and activator of transcription pathway,JAK/STAT通路)、Wnt/β-链蛋白通路(wingless int1/β-catenin pathway,Wnt/β-catenin通路)中关键蛋白的表达变化。结果:提取BMMs诱导后的成熟破骨细胞分泌的细胞外囊泡,NTA结果示粒径集中于49～160nm,外泌体特征性蛋白Alix、CD63、TSG101呈阳性表达。经鉴定的外泌体与成骨样细胞共培养后,成骨细胞分化特异性标志ALP、RUNX2基因转录水平均显著下调,OCN、OPG蛋白表达水平同时下调,RANKL表达较对照组显著增加,表明破骨细胞外泌、体负向调控成骨细胞分化。同时,破骨细胞外泌体干预可显著抑制成骨样细胞JAK/STAT通路中的关键组分磷酸化JAK2和STAT3的表达,而对Wnt/β-catenin通路中的蛋白无明显作用。结论:初步提示破骨细胞骨吸收来源的外泌体可通过调控成骨细胞JAK2/STAT3信号通路,抑制成骨细胞分化。