【摘 要】
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目的：利用多重实时PCR技术,通过优化反应体系和反应条件,探索一种可同时且快速准确检测五类致泄性大肠埃希菌、志贺菌的方法.方法：选择78株大肠埃希菌、志贺菌为研究对象,筛选各菌种特有的一些毒性基因,包括aggR、eaeA、ipaH、lt、stlb、stx1及stx2,以这些毒性基因作为PCR扩增反应的检测目标,通过NCBI网站获取各基因的核苷酸序列,利用引物设计软件primer5.0进行引物序列的
【机 构】
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吉林大学第一医院 130000 长春中医药大学 130000
【出 处】
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第三届全国中西医结合治疗肝病临床经验学术研讨会
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目的：利用多重实时PCR技术,通过优化反应体系和反应条件,探索一种可同时且快速准确检测五类致泄性大肠埃希菌、志贺菌的方法.
方法：选择78株大肠埃希菌、志贺菌为研究对象,筛选各菌种特有的一些毒性基因,包括aggR、eaeA、ipaH、lt、stlb、stx1及stx2,以这些毒性基因作为PCR扩增反应的检测目标,通过NCBI网站获取各基因的核苷酸序列,利用引物设计软件primer5.0进行引物序列的设计,而后进行PCR扩增反应,对反应产物进行验证从而证实引物的特异性,同时通过反应体系中各底物浓度的配比进行调节和对反应条件进行优化调整,确定最佳PCR扩增体系和条件,最终成功建立一种能同时鉴定五类致泄性大肠埃希菌和志贺菌的多重PCR方法.
结果：本研究结果发现,针对各菌种的毒性基因所设计引物经PCR扩增反应的验证,被证实均特异性地扩增出相应的目标基因产物,且在本研究中对78株大肠埃希菌及志贺菌的多重PCR检测结果与单重PCR检测结果吻合.
结论：本研究利用多重PCR技术,成功建立了一种能同时且特异性地检测致泄性大肠埃希菌及志贺菌特异性的检测方法,期望这种检测方法可应用在临床疾病诊断及在食品检验等方面发挥具有重要作用.
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