【摘 要】
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目的 基于结核分枝杆菌细胞壁厚、RNA难以提取的特点,建立高质量结核分枝杆菌RNA的提取方法.方法 采用甲醇氯仿裂解结核分枝杆菌细胞壁,然后加入Trizol试剂提取RNA,和Rib
【机 构】
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北京市结核病胸部肿瘤研究所药物研究室 耐药结核病研究北京市重点实验室 首都医科大学附属北京胸科医院
【出 处】
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中华医学会结核病分会2013年学术大会
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目的 基于结核分枝杆菌细胞壁厚、RNA难以提取的特点,建立高质量结核分枝杆菌RNA的提取方法.方法 采用甲醇氯仿裂解结核分枝杆菌细胞壁,然后加入Trizol试剂提取RNA,和RiboPure-Bacteria Kit(Ambion)的RNAwiz法进行裂解,加氧化锆珠进行震荡破壁,氯仿提取RNA,柱纯化结核分枝杆菌RNA.Nanodrop2000检测产率和纯度,甲醛变性琼脂糖凝胶电泳检测其纯度和完整性,Agilent2100生物分析仪进一步量化评价RNA的质量和完整性.每种方法提取3份OD570为0.2的5m17H9培养的H37Rv.结果 甲醇氯仿裂解细胞壁法和RNAwiz法提取的结核分枝杆菌RNA的获得率分别为1.40±0.44μg和5.21±0.21μg, A260/280的值分别为1.75±0.04和2.10±0.02,A260/A230分别为1.55±0.14和1.83±0.27.RNAwiz法提取的RNA经Agilent 2100检测RNA完整度值(RIN)为8.03±0.25.结论 RNAwiz 法提取的结核分枝杆菌RNA的产率明显高于甲醇氯仿裂解法,纯度和完整性能满足下游表达谱芯片及RT-PCR等实验的需要.
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