【摘 要】
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利用PCR从重组质粒PBV220-IFN-α中扩增鸭α干扰素(IFN-α)成熟蛋白基因,克隆到PMD18-T载体,最后将其连接到原核表达载体pET32a+,转化宿主菌BL21(DE3),经IPTG诱导后获得高效表达.表达的基因工程蛋白分子量大小约37KD,占菌体总蛋白的35％,以包涵体形式存在.利用镍金属螯合介质填料对表达产物进行纯化,经过复性后加入长成单层的鸭胚成纤维细胞(DEF)作用18h,接
【机 构】
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四川农业大学动物科技学院禽病防治研究中心,四川,雅安,625000 动物疫病与人类健康四川省重点实
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第三届第八次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛
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利用PCR从重组质粒PBV220-IFN-α中扩增鸭α干扰素(IFN-α)成熟蛋白基因,克隆到PMD18-T载体,最后将其连接到原核表达载体pET32a+,转化宿主菌BL21(DE3),经IPTG诱导后获得高效表达.表达的基因工程蛋白分子量大小约37KD,占菌体总蛋白的35％,以包涵体形式存在.利用镍金属螯合介质填料对表达产物进行纯化,经过复性后加入长成单层的鸭胚成纤维细胞(DEF)作用18h,接种100个噬斑形成单位的鸭瘟病毒(DPV)强毒,利用定量PCR检测1h、4h、9h、15h、23h、31h、39h、47h、55h、63h DPV数量变化的结果表明,基因工程IFN-α能明显抑制对数期的DPV复制,其DPV核酸的拷贝数比空白对照低5×108,表明所表达的基因工程鸭IFN-α具有进一步临床应用的潜力.
其他文献
为了筛选出对猪体有免疫刺激活性的CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG-ODN),设计了9种未甲基化CpG-ODN不同序列,通过人工合成,分别作用于猪外周血淋巴细胞和脾细胞,进行健康猪外周血淋巴细胞和脾脏免疫细胞体外转化试验.用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测外周血淋巴细胞转化效果和脾细胞的增殖能力和代谢能力,通过测得的OD490值,计算出淋巴细胞增殖指数(SI),筛选CpG-ODN的免疫刺激作用.结果显
本试验提取乳酸杆菌L.casei zhang的肽聚糖和DNA作为佐剂,按不同剂量添加到新城疫油乳剂灭活疫苗及禽流感(H5)亚型油乳剂灭活疫苗中.用加佐剂的新城疫油乳剂灭活疫苗分别对15日龄鸡首免,2周后加强免疫,加佐剂的禽流感油乳剂灭活疫苗分别28日龄鸡进行首免,2周后加强免疫,在二免后的第7天与第14天检测血清HI抗体水平.结果表明,与对照组相比,试验各组抗体水平达到显著或极显著差异水平,可提高
将鸭α干扰素(IFN-α)基因疫苗(pcDNA-SDIFN-α)以每只1、3、6 ug三个剂量基因枪轰击法免疫28日龄鸭,以PBS和空载体质粒pcDNA为对照.各组15 d后接种鸭瘟弱毒疫苗,3 d后开始采血,采用淋巴细胞增殖试验(MTT法)和流式细胞仪(FACS)分别测定鸭外周血中T淋巴细胞转化和CD3+T淋巴细胞数量的动态变化.实验结果显示不同剂量pcDNA-SDIFN-α组均能显著促进外周血
为了获得适宜雏鹅新型病毒性肠炎病毒(NGVEV)生长繁殖的细胞系,本文开展了NGVEV强毒株在鸭胚成纤维细胞(DEF)进行适应性培养和增殖特性研究.结果表明:NGVEV强毒株经尿囊腔途径接种10日龄鸭胚4代,取尿囊液接种DEF,F1代无明显细胞病变;F2代于72-96 h在DEF上出现颗粒状缺失、脱落,但无典型蚀斑出现;F3代于96-120h形成大小不等、圆或椭圆形的典型蚀斑;F5代以后NGVEV
根据已发表的细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)NADL-2株全基因序列,设计一对引物用PCR方法扩增出PPV VP2基因,将其连接到pGEM-T载体中,此重组质粒命名为pVP2.对含伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)Min-A株gD、gI、gE、11K全基因,gG、28K基因部分编码区的质粒pPR128进行改造,用StuI和SphI双酶切,切去部分g
根据Genbank上发表的牛肌生成抑制素(MSTN)基因编码序列设计引物,以牛肌细胞总RNA为模板,采用RT-PCR方法克隆到编码肌肉生成抑制素成熟蛋白基因,并经DNA序列测定,产物全长1128bp,编码375氨基酸序列,并经序列分析,与牛MSTN基因序列的同源性高达99％;与猪MSTN基因序列的同源性为94.1％;与鸡MSTN基因序列的同源性为81.7％.
根据GenBank中鸭疫里默氏杆菌(RA)16SrRNA基因序列设计特异性引物,建立了基于16SrRNA鸭疫里默氏杆菌PCR检测方法.建立的PCR方法对鸭疫里默氏杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、鸭源金黄色葡萄球菌、两双歧杆菌、短乳酸杆菌、屎肠球菌和短小芽胞杆菌进行检测,结果只有鸭疫里默氏杆菌DNA能扩增出844bp的特异条带,其他细菌的DNA不能扩增出任何条带;从凝胶条带中回收DNA条带,测序结果与Ge
根据本实验室建立的检测双歧杆菌、芽孢杆菌及肠球菌的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法,对20日龄樱桃谷鸭经皮下注射途径感染鸭瘟病毒CH强毒株后的消化道内双歧杆菌、芽孢杆菌及肠球菌的数量变化规律进行了研究.结果表明,正常对照组鸭的消化道中肠球菌数量最多,双歧杆菌次之,芽孢杆菌含量最少;消化道双歧杆菌、芽孢杆菌及肠球菌数量在检测期间均比较稳定,无大的波状变化,维持肠道微生态的动态平衡.感染鸭消化道
根据本实验室建立的检测双歧杆菌、芽孢杆菌及肠球菌的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法,对20日龄樱桃谷鸭经皮下注射途径感染鸭瘟病毒CH强毒株后的呼吸道内双歧杆菌、芽孢杆菌及肠球菌的数量变化规律进行了研究.结果表明,正常对照组鸭的呼吸道中肠球菌数量最多,双歧杆菌与芽孢杆菌含量基本一致;呼吸道双歧杆菌、芽孢杆菌及肠球菌数量在检测期间均比较稳定,无大的波状变化,维持正常菌群的动态平衡.感染鸭呼吸道双
根据本实验室建立的检测双歧杆菌、芽孢杆菌及肠球菌的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法,对20日龄樱桃谷鸭经口服途径感染鸭瘟病毒CH强毒株后的消化道内双歧杆菌、芽孢杆菌及肠球菌的数量变化规律进行了研究.结果表明,正常对照组鸭的消化道中肠球菌数量最多,双歧杆菌次之,芽孢杆菌含量最少;消化道双歧杆菌、芽孢杆菌及肠球菌数量在检测期间均比较稳定,无大的波状变化,维持肠道微生态的动态平衡.感染鸭消化道双歧