【摘 要】
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目的 分别构建PTHrP及SOX9的真核表达质粒,双基因共转染骨髓基质干细胞(MSCs),诱导其分化为稳定态骨骺干细胞(PSCs),并对其诱导转染条件进行初步探讨。方法 采用酶消化法+免疫磁珠分离法分选并提纯骨骺干细胞,提取其总RNA为模板,RT-PCR法分别合成PTHrP以及SOX9基因全长,分别插入载体pEGFP-N1相应位置,构建成功真核表达质粒pEGFP-N1/PTHrP以及真核表达质粒p
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科
【出 处】
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中华医学会第十七届骨科学术会议暨第十届COA国际学术大会
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目的 分别构建PTHrP及SOX9的真核表达质粒,双基因共转染骨髓基质干细胞(MSCs),诱导其分化为稳定态骨骺干细胞(PSCs),并对其诱导转染条件进行初步探讨。方法 采用酶消化法+免疫磁珠分离法分选并提纯骨骺干细胞,提取其总RNA为模板,RT-PCR法分别合成PTHrP以及SOX9基因全长,分别插入载体pEGFP-N1相应位置,构建成功真核表达质粒pEGFP-N1/PTHrP以及真核表达质粒pEGFP-N1/SOX9,并分别进行双酶切鉴定以及测序鉴定；原代培养间充质干细胞,脂质体介导法将上述两种真核表达质粒同时,或者在不同时间点转染MSCs,并采用流式细胞仪、RT-PCR、Western-blot、免疫荧光法检测细胞PTHrP、及SOX9、FGFR-3、碱性磷酸酶、Ⅹ型胶原以及Ⅱ型胶原表达情况。
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