【目的】建立阿莫西林、青霉素、氨苄西林、苯唑西林、头孢唑啉、氯唑西林、头孢氨苄及头孢羟氨苄等8种β-内酰胺类药物在猪肉组织中的高效液相色谱-电喷雾串联质谱多残留检测方法。【方法】猪肉样品用乙腈-水(80+20,VN)提取,经HLB柱净化,氮气吹干,用水定容,正己烷除脂后,进行LC-MS/MS检测。含0.1%甲酸的乙腈-甲醇(50+50,V/V)和0.1%甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱外标法定量。【结果】8种β-内酰胺类抗生素在5.00～100μg/L范围内,峰面积与浓度呈现很好的线性,相关系数大于0.99。在猪肉中添加25、50及100μg/kg三个浓度水平,处理后测定,8种药物的回收率、批内变异系数、批间变异系数分别为阿莫西林60.00%～74.4%、1.1%～13%、12%～17%,青霉素82.1%～98.2%、1.6%～13%、10%～17%,氨苄西林74.2%～85.6%、2.3%～10%、7.3%～11%,苯唑西林78.6%～97.7%、2.9%～14%、14%～17%,头孢唑啉85.1%～105.0%、2.1%～13%、13%～14%,氯唑西林75.6%～89.3%、3.1%～14%、12%～16%,头孢氨苄68.7%～75.8%、2.2%～9.8%、6.8%～18%,头孢羟氨苄54.2%～68.6%、4.1%～14%、11%～16%。8种β-内酰胺类药物在猪肉中的检测限(LOD)和定量限(LOQ)范围为:0.5μg/kg～2.5μg/kg。【结论】本研究建立的高效液相色谱-电喷雾串联质谱法检测猜肉组织中的8种β-内酰胺类抗生素,方法灵敏度高、特异性强、重现性好,前处理方法简单易行,符合残留检测的要求。