聚球藻7942中生物钟基因kaiC的克隆和敲除

来源 :庆祝中国藻类学会成立30周年暨第十五次学术讨论会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zrbgo
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本文克隆的kaiC基因是为了构建敲除载体,反过来敲除聚球藻7942的kaiC基因,以探索kaiC蛋白可能的功能。为了从聚球藻7942中克隆kaiC基因,按已知碱基序列中保守部分设计引物,并送有关公司合成引物。接着以聚球藻7942基因组DNA为模版,用PCR技术克隆出kaiC基因。把基因连在pUC 19载体上测序鉴定后,把kaiC基因片段正连和反连到质粒pRL-489上PbsbA启动子下游、BamHI位点之间,构建成带有kaiC基因的两种穿梭表达载体;正义载体pRL- Sen kaiC和反义载体pRL-Anti kaiC。把它们分别转化大肠杆菌DHSao然后提取载体、酶切和电泳鉴定。证明得到大肠杆菌的转化子后,用三亲接合转移技术转化单细胞蓝藻聚球藻7942,通过抗菌素初步筛选已获得转化子。现在正在作进一步筛选,并作生理测定探索kaiC的功能。
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