【摘 要】
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目的:构建靶向Survivin基因及CDK1基因的短发夹样RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达载体并研究其对鼻咽癌细胞CNE-2的干扰效应.方法:根据Genbank报道的Survivin序列及CDK1序列,遵循shRNA设计原则设计并合成各自靶向的Survivin、CDK1基因的shRNA寡核苷酸序列,构建pU6-Survivin、pU6-CDK1及pU6-Survivin
【机 构】
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570228 海南大学农学院 510280 南方医科大学珠江医院医学检验中心
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目的:构建靶向Survivin基因及CDK1基因的短发夹样RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达载体并研究其对鼻咽癌细胞CNE-2的干扰效应.
方法:根据Genbank报道的Survivin序列及CDK1序列,遵循shRNA设计原则设计并合成各自靶向的Survivin、CDK1基因的shRNA寡核苷酸序列,构建pU6-Survivin、pU6-CDK1及pU6-Survivin-CDK1重组载体,经酶切及测序鉴定,用脂质体Lipofectamine 2000方法将其转染入CNE-2细胞株中,逆转录实时荧光定量PCR(Rr-qPCR)检测Survivin、CDK1 mRNA的基因表达水平.
结果:经酶切及测序结果分析,pU6-Survivin、pU6-CDK1及pU6-Survivin-CDK1重组载体均成功构建,经Graphpad Prism5统计分析RT-qPCR的结果:Survivin+CDK1 shRNAs组中Survivin mRNA下调为66％,与空白组、阴性对照组有显著差异(p＜0.01,n=3),与Survivin-shRNA组差异无统计学意义;Survivin+CDK1 shRNAs组中CDK1 mRNA下调为72％,与空白组、阴性对照组有显著差异(p＜0.01,n=3),与CDK1-shRNA组差异有显著性(p＜0.05,n=3).
结论:成功构建对鼻咽癌细胞CNE-2具有干扰效应的Survivin及CDK1双基因联合靶向shRNA重组载体,从基因水平分析其协同作用中Survivin基因与单基因干扰差异无统计学意义,CDK1基因比单基因干扰作用较强.
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