【摘 要】
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目的：S100A4作为一种钙离子结合蛋白参与细胞的异常增殖、恶变、侵袭转移等肿瘤发生发展中不同阶段的病理过程.本研究应用RNA干扰技术沉默喉癌HEP2细胞中S100A4基因的表达
【机 构】
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中国医科大学实验动物部,沈阳,110001;中国医科大学遗传学教研室,沈阳,110001中国医科大学附属第一医院耳鼻喉科,沈阳,110001中国医科大学遗传学教研室,沈阳,110001中国医科大学实验
【出 处】
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2013‘第十一届中国北方实验动物科技年会
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目的：S100A4作为一种钙离子结合蛋白参与细胞的异常增殖、恶变、侵袭转移等肿瘤发生发展中不同阶段的病理过程.本研究应用RNA干扰技术沉默喉癌HEP2细胞中S100A4基因的表达,探讨其对HEP2细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响.方法：构建靶向S100A4基因的shRNA真核表达质粒pGPU6-GFP-Neo-S 100A4和无义对照质粒,以脂质体法转染HEP2细胞.Real-time PCR和Western blotting验证S100A4基因在mRNA和蛋白水平的表达,CCK8法,流式细胞术法和caspase活性检测试剂盒分别检测HEP2细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡.结果：成功构建pGPU6-GFP-Neo-S100A4载体并转染HEP2细胞.转染质粒组HEP2细胞中S100A4 mRNA表达量较对照组下降了83.2％,同时也显著抑制了蛋白的表达.转染质粒组HEP2细胞增殖速率明显下降(P＜0.01),细胞出现G1期阻滞.流式细胞术实验显示,S100A4基因沉默的HEP2细胞凋亡显著增加(P＜0.01).caspase活性检测结果显示caspase3,8,9活性显著增加(P＜0.01).结论：pGPU6-GFP-Neo-S 100A4质粒转染喉癌HEP2细胞能有效沉默S100A4基因的表达,从而抑制HEP2的增殖、影响细胞周期和通过激活caspase3,8,9进而增强细胞凋亡.
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