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柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)是一种单细胞胞内寄生虫,也是严重危害养鸡业的重要病原之一。目前对于球虫病的防治,仍主要依靠于药物。球虫病防治药物主要分为两大类:离子载体类抗生素和化学合成药物,马杜拉霉素(Maduramycin)和地克珠利(Diclazuril)是这两类药物中比较具有代表性的药物。在长期用药物控制球虫病的同时,球虫极易对药物产生耐药性,为球虫病的防治带来了困境。为了能揭开球虫耐药性神秘的面纱,实验室前期通过药物诱导获得了马杜拉霉素耐药株和地克珠利耐药株,利用RNA-seq方法比较了柔嫩艾美耳球虫马杜拉霉素耐药株和地克珠利耐药株与敏感株的差异,筛选出部分差异基因。本研究根据柔嫩艾美耳球虫耐药株与敏感株转录组分析比较结果,选取耐药株与敏感株的差异表达下调基因膜骨架蛋白1(IMC1),利用RT-PCR扩增技术,以柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊c DNA为模板克隆IMC1,经过PCR和酶切鉴定正确后测序,将测序正确的序列连接到原核表达载体p GEX-4T-2中,构建原核表达重组质粒p GEX-4T-Et IMC1,并在大肠杆菌BL21中诱导表达,获得重组蛋白r Et IMC1,纯化蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,用RT-q PCR和Western-blot检测Et IMC1在耐药株和敏感株中的转录水平和表达水平。结果显示,Et IMC1在地克珠利耐药株和马杜拉霉素耐药株中的转录水平显著低于敏感株,蛋白在耐药株中为低表达,转录与表达水平趋势一致。间接免疫荧光检测发现该蛋白位于虫体表面,体外抑制试验结果显示用抗r Et IMC1多克隆抗体孵育后的子孢子入侵DF-1细胞,其入侵率比对照组下降80%。研究结果提示,Et IMC1的低表达可能有助于在药物作用前期帮助球虫逃避药物的损害,以及提高对药物损害的抵抗能力,同时Et IMC1可能在子孢子入侵宿主细胞过程中发挥了重要作用。本研究为阐明球虫耐药性产生的分子机理提供了一定基础。