MicroRNA高灵敏检测的方法学研究

来源 :中国化学会第29届学术年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:shinetar
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  MicroRNA(miRNA)是体内最大的基因调控家族,[1,2]作为潜在的癌基因或抑癌基因,是肿瘤发展过程中有效的标志物.但由于其长度较短,在血清中浓度低,对其检测存在一定困难.基于二茂铁覆盖的纳米金/抗生物素蛋白复合物进行信号放大以及银纳米簇独特的荧光特性,开发了电化学及荧光检测miRNA的方法.采用生物素标记的miRNA以及靶基因miRNA与芯片表面固定的DNA探针发生竞争反应,随后衍生电化学信号放大的复合物.[3]采用上述方法检测胶质瘤血清中miRNA的表达水平是健康对照血清的3.1倍,这与聚合酶链式反应结果完全一致.由于C碱基优先与Ag+作用,将3-CCC和CCT-5序列分别悬挂在发卡型核酸探针的两端作为合成银纳米簇的模板,通过还原吸附在C碱基上的Ag+合成了具有强荧光信号的银纳米簇.[4]当发卡型核酸探针的环状部分与靶序列miRNA杂交时,3-CCC和CCT-5序列分离,导致银纳米簇的荧光特性发生改变.上述方法克服了传统检测方法灵敏度低、步骤繁琐等问题,为免标记、高灵敏、高选择性检测miRNA的表达水平提供了新思路.
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