【摘 要】
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目的:1.通过研究β-榄香烯对人肝癌HepG2细胞体外增殖抑制及诱导凋亡的研究2.通过建立小鼠肝癌H22荷瘤小鼠模型,观察β-榄香烯对p65、caspase-3、caspase-8凋亡相关蛋白表达,探讨β-榄香烯体内抗肝癌促凋亡的机制.方法:1.体外培养人肝癌HepG2细胞,采用MTT法检测β-榄香烯对HepG2细胞增殖的影响,Annexin V-FITC/PI双染色法通过流式细胞仪检测细胞的凋亡
【机 构】
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南京中医药大学第一临床医学院 南京中医药大学第一临床医学院;江苏省中医院消化科
【出 处】
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第二十六届全国中西医结合消化系统疾病学术会议
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目的:1.通过研究β-榄香烯对人肝癌HepG2细胞体外增殖抑制及诱导凋亡的研究2.通过建立小鼠肝癌H22荷瘤小鼠模型,观察β-榄香烯对p65、caspase-3、caspase-8凋亡相关蛋白表达,探讨β-榄香烯体内抗肝癌促凋亡的机制.
方法:1.体外培养人肝癌HepG2细胞,采用MTT法检测β-榄香烯对HepG2细胞增殖的影响,Annexin V-FITC/PI双染色法通过流式细胞仪检测细胞的凋亡情况.2.通过腋下接种细胞密度为1.0×106个/ml小鼠肝癌H22细胞悬液,建立稳定的小鼠肝癌肿瘤模型,分为模型组、β-榄香烯组低剂量组、中剂量组、高剂量组,以灌胃为治疗方式,观察各组小鼠的肿瘤大小变化,第14天处死小鼠,剥取肿瘤组织,提取组织蛋白,通过western bolting法观察各实验组p65、caspase-3、caspase-8蛋白表达的影响.
结果:β-榄香烯对人肝癌细胞HepG2细胞的生长具有显著增殖抑制作用,24h后,75ug/mLβ-榄香烯组已经对细胞产生20.87％的抑制率,随着时间和药物浓度的递增,β-榄香烯对人肝癌细胞的抑制作用呈现上升趋势,48h后400ug/mL组抑制率高达80.46％.Annexin V-FITC/PI染色法检测到低剂量药物浓度在短时间内就可对人肝癌细胞HepG2细胞呈现大量凋亡现象,24h内不同浓度的β-榄香烯各药物浓度组早期凋亡率未见明显差异(p＞0.05),不同药物浓度组中晚期凋亡率可见随着浓度的递增而递增,且高药物浓度组可见坏死细胞.经过14天灌胃治疗后可发现不同浓度的β-榄香烯肿瘤与模型对照组比较均有不同程度的缩小(p＜0.05)低、中、高剂量β-榄香烯药物组抑瘤率分别22.38％、34.51％和38.31％.Western bolt检测到不同药物组p65与模型组相比表达均有下降(p＜0.05),不同药物浓度间未见明显差异(p＞0.05),不同药物浓度组caspase-3蛋白与模型组相比均有明显高表达,统计有显著差异(p＜0.05),其中β-榄香烯高剂量药物浓度组与β-榄香烯低剂量组相比有统计学差异(p＜0.05).β-榄香烯高剂量与中剂量药物浓度组、低剂量与中剂量药物浓度组均未见明显差异(p＞0.05).Caspase-8蛋白中、高剂量与模型组相比表达均有上调(p＜0.05),低剂量组与模型组未见明显差异(p＞0.05).
结论:β-榄香烯抗肝癌作用可能是通过抑制肝癌细胞增殖并促进其凋亡而完成的;β-榄香烯可能是通过影响NF-κB p65、caspase-3及caspase-8蛋白的表达而促进肝癌的凋亡来完成抗肝癌作用.
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