【摘 要】
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目的:探索适于芯片杂交分型的荧光标记引物多重扩增方法并优化杂交条件。方法:在单个位点扩增成功的基础上,通过对PCR的多个关键因素进行调整和杂交液浓度及混合比例的优化获
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目的:探索适于芯片杂交分型的荧光标记引物多重扩增方法并优化杂交条件。方法:在单个位点扩增成功的基础上,通过对PCR的多个关键因素进行调整和杂交液浓度及混合比例的优化获得理想的杂交检测信号。结果:实验表明在合理设计多对扩增引物的前提下,基因组DNA浓度40ng/ul,dNTPs各200 μM, 0．5U Taq酶,Mg2+浓度为2mM的1×PCR缓冲液体系中,尝试不同引物对的有效组合及浓度调节,荧光标记引物的多重扩增产物适于芯片杂交分型。结论:在多重扩增的影响因素中模板DNA的总量,循环次数、缓冲液的浓度和Taq DNA聚合酶浓度的调整没有显著改善,而引物对之间相对浓度,Mg2+与dCTP浓度的平衡诸因素之间的优化组合对于获得高特异性的扩增产物至关重要, 通过合理组合目的片段的扩增可以获得理想杂交分型信号。
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