【摘 要】
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西瓜花叶病毒(watermelon mosaic virus,WMV)等引起的西瓜病毒病是西瓜生产的主要限制因子.真核翻译起始因子(eukaryotic translation initiation factor 4E,eIF4E)在植
【机 构】
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旱区作物逆境生物学国家重点实验室/西北农林科技大学植物保护学院,杨凌712100
【出 处】
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中国植物病理学会2014年学术年会
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西瓜花叶病毒(watermelon mosaic virus,WMV)等引起的西瓜病毒病是西瓜生产的主要限制因子.真核翻译起始因子(eukaryotic translation initiation factor 4E,eIF4E)在植物与病毒互作中发挥极其关键的作用,eIF4E或者其同源异构体eIF (iso) 4E与病毒VPg蛋白直接相互作用,这是病毒感染的必要条件.抑制eIF4E或eIF(iso)4E的表达以有效地阻断病毒的复制与传播途径,从而可使植物获得广谱病毒抗性.为了检测eIF4E及eIF (iso) 4E蛋白在植物中的表达变化,我们克隆了中国西瓜eIF4E基因及其同源异构体eIF(iso)4E(GenBank ID：KJ468029,KJ468030).二者核酸序列长度分别为708bp和612bp,均为完整的单一CDS,与国外西瓜克隆基因同源率高于90.0％.将其连接到原核表达载体pET28a上,转化大肠杆菌BL21(DE3)后诱导表达.SDS-PAGE电泳分析表明所诱导表达的eIF4E和eIF (iso) 4E蛋白的分子量都大约是25kD.二者均以包涵体的形式诱导表达,温度和诱导表达时间对蛋白表达量影响不大.以表达的融合蛋白为抗原,免疫家兔后制备多克隆抗体.ELISA检测表明eIF4E蛋白抗体效价为1/12800,eIF (iso) 4E蛋白抗体效价为1/25600.Western blot分析表明所制备的抗体可用于对西瓜植株eIF4E和eIF (iso) 4E蛋白的特异性鉴定.以制备抗体检测eIF4E和eIF (iso) 4E基因沉默西瓜植株表明,eIF4E和eIF (iso) 4E蛋白表达均被显著抑制.
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