【摘 要】
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目的:斑马鱼是近年来逐渐深入研究的模式动物,转基因斑马鱼可在显微镜下就能够观察到节间血管、血流和红细胞的形态,因而用于血管形成和血液类疾病药物筛选,考察药物的抑制血
【机 构】
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山东省科学院生物研究所药物筛选平台;
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目的:斑马鱼是近年来逐渐深入研究的模式动物,转基因斑马鱼可在显微镜下就能够观察到节间血管、血流和红细胞的形态,因而用于血管形成和血液类疾病药物筛选,考察药物的抑制血管生成的作用。本试验考察PTK787对斑马鱼血管生成及对循环系统的影响。方法:(1)转基因斑马鱼(TG)种鱼来自于哈佛大学医学院。实验试剂:PTK787瑞士诺华公司,用0.1%二甲基亚砜助溶配制成终浓度1μg·ml-1、0.5μg·ml-1、0.25μg·ml-1、0.125μg·ml-1与0.0625μg·ml-1水溶液,置冰箱中备用。主要实验仪器:COIC XSZ-HY荧光显微镜和COIC倒置生物显微镜XDS-1B。(2)施药实验所用的斑马鱼为血管荧光转基因斑马鱼(VEGFR2:GFP)。鱼胚胎于24hpf后取出,脱去膜胚胎加入96孔板中;将试验药物加入96孔板中,PTK787每个浓度各10个胚胎;对照组10个,不加入任何药物,加药后96孔板放入培养箱24小时。(3)结果观察24h后将试验用96孔板取出,加入1‰三卡因溶液麻醉鱼体,随后将鱼体放于载玻片上,在荧光显微镜下记录斑马鱼异常和节间血管强弱状况,并对体节间血管计数。(4)统计分析:各组指标均以(?)±SD表示,使用SPSS11.3统计软件进行统计描述,组间比较采用t检验。
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