厌氧氨氧化污泥16S rDNA-PCR反应体系的优化

来源 :2012《中国给水排水》杂志社第九届年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yuyanbbs
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  为了优化以厌氧氨氧化污泥DNA为模板的16S rDNA-PCR反应体系,采用单因子试验方法对影响其PCR体系的模板DNA用量、引物用量、Taq DNA聚合酶用量、Mg2+用量、dNTP用量和循环次数6个因素进行优化试验,建立适合的PCR反应体系。最后得出,最适宜的PCR扩增体系为:5 μL的10×buffer(不含Mg2+)、2μL的25mmol/LMgCl2、1.5μL的2.5mmol/L dNTP Mixture、10μmol/L引物各0.5μL、1μL的5U/μL Taq酶、0.5μL的模板DNA,加灭菌超纯水补足至50μL;PCR循环条件为:94℃预变4min;94℃变性30s,56℃退火45s,72℃延伸1min,循环次数分30次;72℃下延伸5min。利用优化体系进行PCR反应,可获得稳定性高、重复性好、背景清晰的电泳结果。
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