【摘 要】
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以荷斯坦牛胚胎和小鼠胚胎为材料,研究了犊牛血清、饲养层、培养液、添加物和消化液对牛胚胎干细胞和小鼠胚胎干细胞克隆效率的影响,结果表明,在24 h内使小鼠胚胎贴壁率达86％
【机 构】
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西北农林科技大学家畜生殖内分泌与胚胎工程农业部重点开放实验室
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以荷斯坦牛胚胎和小鼠胚胎为材料,研究了犊牛血清、饲养层、培养液、添加物和消化液对牛胚胎干细胞和小鼠胚胎干细胞克隆效率的影响,结果表明,在24 h内使小鼠胚胎贴壁率达86％以上的犊牛血清可用于小鼠和牛胚胎干细胞的分离;在ES细胞分离与克隆中,犊牛血清浓度以15％-20％为宜,在DMEM(L)培养基中添加0.1 μMNa2SeO3+0.1 nMβ-巯基乙醇+10 ng/ml IGD+1000 IU/ml LIF,能显著提高牛ES细胞分离与克隆效率;在TCM199,DMEM(高糖)和DMEM(低糖)3种培养基中,低糖DMEM更适宜于牛ES细胞的分离,优秀胚胎形成的团状ICM更适宜于分离与克隆ES细胞,在37℃用低浓度消化液处理ICM或ES细胞集落,再以机械将其离散为细胞小块,ES细胞克隆效率最高.
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