表达V5表位的重组猪圆环病毒2型毒株及其生物学特性鉴定

来源 :中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zyb1026
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
  为了探讨猪圆环病毒2型(PCV2)作为表达外源表位的可行性,本研究构建了以PCV2基因组为骨架。在ORF2编码Cap蛋白的C末端插入了源自副流感病毒5型的一个含14氨基酸序列的V5表位标签,用构建感染性分子克隆重组质粒转染细胞,拯救出一株表达V5表位标签的重组毒株,命名为recPCV2/CL—V5。采用免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)、血清中和试验(SNA)、捕获ELISA及免疫电镜对重组毒株进行了鉴定。结果表明:在recPCV2/CL-V5株感染细胞中检出PCV2和V5表位抗原;PCV2阳性血清和中和性单克隆抗体(1D2)能够完全中和recPCV2/CL-V5株的细胞感染性;recPCV2/CL.V5株在繁殖动力学和形态学上与亲本病毒基本一致。鉴于recPCV2/CL-V5株插入了一个v5表位,采用PCR、IPMA和捕获ELISA与亲本毒株相鉴别。recPCV2/CL-V5株经细胞连续传10代,体外培养增殖性能稳定,毒价可达106.25TCID50、mL。拯救的带有V5表位标签的重组PCV2毒株,为深入研究该病毒复制理、抗原表位展示及分子标记疫苗和鉴别诊断等开创了新的平台。
其他文献
本文综述竹胶合板的物理力学性能、保温隔音性能、老化与耐候性能、抗震性能、空气质量标准,旨在为竹胶合板在建筑领域的应用提供参考。
采用共聚方法制备碱木质素-苯酚-甲醛共聚胶黏剂(KLPF),研究了碱木质素(KL)替代苯酚量对KLPF性能的影响,并分析其在竹胶板中应用的可行性。结果表明:碱木质素替代苯酚量20~30%,碱木质素-苯酚-甲醛共聚胶黏剂生产的竹胶板性能优异,其静曲强度及其弹性模量、吸水厚度膨胀率、胶合强度等物理力学性能均符合“混凝土模板用竹材胶合板”标准的B类竹材胶合板要求,与纯酚醛胶所压板材的胶合性能相当,且对竹
液化过程主要发生分解反应和缩聚反应。为考察液化前期分解反应产物L10和L60,及液化后期缩聚反应产物L120和L180的可纺性,本文采用二苯基甲烷二异氰酸酯(MDI)作为合成剂与液化产物反应,制备聚氨酯纺丝液。并通过测定纺丝液的羟值、分析MDI加入量对纺丝过程各因素的影响,最终来确定不同样品制各初纤维的优化工艺条件。结果表明:1)液化后期,产物中的羟值较低;2)液化产物 L10,L60,L120和
热裂解是将生物质转化成为商品位能源和化工产品的关键技术,已经成为世界各国的研究热点。为探究生物质快速热裂解反应特性,本文基于热解气质联用系统(PY-GC/MS)对不同生物质热裂解产物的组成和分布进行了考察。结果表明,生物质热裂解产物的种类主要包括含氧宫能团的酚类、酯类、糖类、醛类、酸类、酮类、醇类等;落叶松热裂解产物相对红橡得到更多的酚类和糖类物质,而酸类物质相对红橡较少;纤维素热裂解主要产物为左
Conventional reverse genetics for classical swine fever virus(CSFV)is based on the transfection ofpennissive cells with either in vitro.Or intracellularly-synthesized RNA transcripts from a viral geno
为建立一种能够区分猪瘟病毒(cSFv)强毒与弱毒疫苗c株的sYBR Green I荧光定量RT—PcR结合熔解曲线分析方法,本研究对GenBank中登录的25株csFv强毒株和兔化弱毒疫苗c株全基因组序列进行比较分析。设计一对共用下游引物以及分别针对csFv强毒株与弱毒疫苗的特异性上游引物,其Tm值分别为84.5±O.5℃和88.5±0.5℃,熔解曲线分析显示为单特异峰。检测结果显示本实验建立的鉴
Alphavirus replicon-based DNA vaccines have emerged as a promising approach to generation ofantigen—specific immune responses.However,due to their low immunogenicity,there is a need for other approach
细胞亲环蛋白A(cyPA)在多种病毒感染中起重要的调控作用。本实验室前期蛋白质组学研究发现,猪瘟病毒(csFv)感染后PK-15细胞的cyPA明显上调表达。为探讨cyPA在csFV复制与增殖中的作用,本研究首先采用环孢素A(CsA)处理PK-15细胞,特异性地抑制CyPA顺反异构酶活性,观察对CSFV的影响,在csA处理后24 h、48 h、72 h收集细胞和细胞冻融上清,进行病毒基因组拷贝数和病
前期的研究表明猪瘟兔化弱毒疫苗荧光定量RT-PCR与兔体定型热试验之间存在正相关性,本研究利用荧光定量RT-PcR方法对278批次猪瘟兔化弱毒疫苗进行检测,分别检测其疫苗含量及牛病毒性腹泻病毒污染情况。结果表明,278批次猪瘟疫苗中有66批(24%)疫苗含量达不到规程标准,有42批(15%)疫苗存在牛病毒性腹泻病毒污染;从中抽取6份荧光定量检测疫苗含量较低的疫苗用兔体定型热试验进行验证,两种方法结
为构建稳定表达猪瘟病毒(CSFV)Npro蛋白的PK-15细胞系,本研究采用PCR方法,以pOKl2/F1-9质粒为模板扩增Npro基因,并引入Flag标签序列,将其连到plRES2-EGFP载体,构建重组质粒pGFP-Npro;通过脂质体将pGFP.Npro转染至PK-15细胞中,利用G418加压筛选、纯化得到稳定表达Npro蛋白的细胞系;连续传代30代后,进行RT—PCR、Western bl