本文将高灵敏的核酸扩增反应与高特异的序列识别切割反应以及可视化的纳米金探针杂交反应相结合,通过程序对三个阶段反应的温度进行控制,实现集核酸扩增、信号转化及可视化判读于一体的“管内实验室”(“Tube-Lab”),建立在单管中依次进行基因DNA模板扩增、序列识别切割以及纳米金探针杂交的可视化检测新方法.通过优化反应条件,对纳米金探针进行特殊硅烷化处理使之能够耐受核酸扩增以及序列识别切割反应的温度,对反应体系进行兼容合并使之能够同时满足三阶段反应要求,最终实现在单管同一体系中仅通过温度程序控制就能同时实现对核酸靶序列的高灵敏、高特异、可视化的闭管检测.根据方法评价结果显示,以EGFR858位点突变检测为例,检测灵敏度可达到2.5 aM,并可区分检测高达0.1％的混合点突变模板.另外,由于本方法是基于纳米金探针杂交反应的可视化检测,无需昂贵的检测仪器,单管闭管检测又极大地降低了扩增产物交叉污染风险,因此,该方法非常适用于低成本的疾病相关基因突变检测.