为建立Real-time PCR方法检测鳜鱼T细胞受体α链(TCRα)转录水平,根据GeneBank上鳜鱼TCRα基因序列设计并合成特异性引物,以鳜鱼β-actin基因作为内参,采用RT-PCR方法从鳜鱼的胸腺总RNA中扩增得到鳜鱼TCRα和β-actin基因,将目的片段纯化后克隆到PMD18-T载体上,测序鉴定。以阳性质粒为标准品,采用SYBR GreenⅡ染料法进行实时荧光定量PCR扩增,构建标准曲线并进行溶解曲线分析。结果表明鳜鱼TCRα基因的Ct值与标准品稀释度在1×10~2～1×10~8拷贝/μL范围呈良好的线性关系,r~2达0.99以上,溶解曲线分析表明产物为特异的单峰。建立鳜鱼TCRα实时荧光定量PCR检测方法,为在mRNA水平对鳜鱼TCRα的定量分析奠定了基础。