间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清1,2,4和5型鸭疫里默氏杆菌抗体的研究

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本研究针对我国流行的血清1、2、4和5型鸭疫里默氏杆菌(RA).应用超声波裂解法制备的RA裂解物作为抗原包被酶标板,成功建立了检测这4种血清型RA抗体的间接ELISA法。1、2、4和5型RA抗原的包被浓度分别为3.8、4.5、2.8和3.7μg/ml.酶标羊抗鸭IgG的工作浓度为1:4000,37 ℃包被时间为2小时.封闭时间为30分钟。该法与鸭抗多杀性巴氏杆菌阳性血清、鸭抗Ⅰ型鸭病毒性肝炎阳性血清、鸭抗鸭源大肠杆菌K88阳性血清、鸭抗鸭源肠炎沙门氏菌阳性血清、鸭抗鸭源大肠杆菌K99阳性血清、鸭抗鸭瘟阳性血清无交叉反应;能被同型RA特异抗原阻断;灵敏度是微量凝集试验的50-100(1型RA)、25-100(2型RA)、12-100(4型RA)和25-200(5型RA)倍;应用建立的标准曲线或回归方程对血清样品检测一个稀释度即可获得血清样品的ELISA 滴度.使得大规模的血清样本定量检测变得相对简单和容易。该法敏感性高、特异性强、重复性好.适于作为血清1、2、4和5型RA感染的血清流行病学调查和疫苗免疫效果的评价。
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