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目的:CXCL-1又被称作GRO-α,属CXC趋化因子家族,早期研究发现CXCL-1在很多肿瘤的的发生、生长、发展、增殖、侵袭、迁移、血管新生、淋巴管新生、淋巴转移、转化等过程中发挥关键作用.但是目前CXCL-1及其受体与肝脏疾病发生发展间的关系报道甚少,因此,本研究拟通过构建目的基因CXCL-1慢病毒表达系统,以探讨趋化因子CXCL-1与正常肝细胞的相关性,并为下一步研究其在肝癌细胞中的生物学功能提供实验基础.
方法:构建CXCL-1慢病毒表达系统,建立携带GFP荧光标记并过度表达CXCL-1的正常肝细胞株。在此细胞系建立的基础上,通过细胞单克隆形成实验、MTT比色法、流式细胞技术检测细胞周期来研究CXCL-1对正常肝细胞体外生长增殖能力的影响;利用Transwell小板实验检测目的基因CXCL-1对正常肝细胞迁移能力的影响。探讨CXCL-1对正常肝细胞生物学功能的影响。实验所得的数据用SPSS19.0软件包进行数据分析,用重复测量单因素方差分析对比转染前后细胞正常肝细胞株细胞功能试验(包括MTT、胞单克隆形成实验、流式细胞技术检测、Transwell迁移实验)是否具有显著性差异,P小于0.05为有统计学意义。
结果:1)成功构建目的基因CXCL-1慢病毒表达系统,病毒滴度检测结果为2.00E+8TU/ml;2)转染48h后经流式细胞仪检测,三质粒比例为4:3:2时转染率最高,达95%左右;3)CXCL-1/7702组克隆形成数量及克隆形成率也显著高于其余两对照组(非参数秩和检验得出P<0.05);4)MTT比色法结果显示,CXCL-1/7702组分别与空载组及空白对照组相比较,生长速度明显较快(区组方差分析得出P<0.05);5)Transwell实验显示,正常肝细胞系7702无迁移能力,CXCL-1对正常肝细胞系7702迁移能力没有影响。
结论:趋化因子CXCL-1对正常肝细胞具有明显的促细胞生长功能,但无促进正常肝细胞迁移的功能。